Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

2 Dasar Teori Penting untuk :  Memahami fungsi katalitik  Memahami fenomena biologik, pengaruh suhu, pH dll.  Prosedur pemurnian enzim.

Presentasi serupa


Presentasi berjudul: "2 Dasar Teori Penting untuk :  Memahami fungsi katalitik  Memahami fenomena biologik, pengaruh suhu, pH dll.  Prosedur pemurnian enzim."— Transcript presentasi:

1

2 2 Dasar Teori Penting untuk :  Memahami fungsi katalitik  Memahami fenomena biologik, pengaruh suhu, pH dll.  Prosedur pemurnian enzim

3 3 • Perubahan konformasi Sisi aktif beberapa enzim mengandung gugus fungsional residu asam amino (berpartisipasi dalam proses katalitik sebagai pemberi atau penerima proton) • Gugus -SH dimiliki oleh sistein • Gugus imidazole oleh histidin

4 Faktor2 yang mempengaruhi aktivitas enzim 1) Pengaruh Suhu

5 5 1)Pepsin pH optimum 1,6 2) Glukosa 6 fosfatase pH optimum 7,8 2) Pengaruh pH

6 3) Pengaruh jumlah substrat

7 7 Pengukuran aktivitas enzim: Berdasar pada aktivitasnya. 1 IU, micromol P/menit Pada enzim tertentu : 1 IU, perobahan kepekatan pada 340nm sebesar 0,001 per menit Kecepatan reaksi : jumlah substrat yg diubah per satuan waktu jumlah produk yg terbentuk per satuan waktu

8 8 Prosedur : 1. Panaskan larutan 1% kasein dalam bufer fosfat pH 8.0 sebanyak 30,0 ml, selama 5 menit, pada 38 0 C. 2. Tambahkan bufer fosfat dan larutan enzim dalam bufer fosfat pH 8,0 sesuai daftar dan diaduk rata dan di inkubasikan (setelah penambahan enzim selama 20 menit. 3. Siapkan seperti pd tabel : Pengaruh konsentrasi substrat terhadap aktivitas enzim tripsin No.TabungSubstrat BufferEnzim 1t = 0 + t=20 menit 2,0 ml3,0 ml2,0 ml 2t = 0 + t=20 menit3,0 ml2,0 ml 3t = 0 + t=20 menit4,0 ml1,0 ml2,0 ml 4t = 0 + t=20 menit5,0 ml0,0 ml2,0 ml

9 9 4. Inkubasi pada suhu 38 0 C selama 20 ‘ (T 20’) 5.Tambah TCA 3 ml 6. Campuran disentrifugasi 10’ (2000 rpm) 7.Supernatan + 1 mL Follin Ciocalteu + 4 ml 0,5 NaOH. 8.Diamkan 10‘ 9.Bacaabsorbansinya pada 650 nm. T 0 : Penambahan TCA dan kasein dibalik : TCA ditambahkan sebelum inkubasi & kasein ditambahkan setelah inkubasi Tugas : 1)Tentukan aktivitas enzim dengan rumus : Absorbansi T20 – Absorbansi T 0 Aktivitas Enzim (v) = Waktu inkubasi Y B x A

10 Data untuk membuat persamaan LR Sumbu xSumbu y Kadar kasein (mL) Kadar (%)Aktivitas Enzim (V0) ) Buat LR, hitung Km & Vmaks y B X A Kadar kasein mL : dikonversi ke % dengan rumus V1. N1 = V2. N2

11 11 Persamaan Michaelis-Menten & Grafiknya Grafik mula-mula : [S] vs V 0 Kebalikannya :

12 12 Pengaruh Lama Waktu Inkubasi terhadap aktivitas enzim tripsin Dasar Metode : • Asam amino bersifat zwiter ion, titrasi ditambahkan formalin untuk mengikat –NH 2 (dihasilkan senyawa dimetiol) sehingga asam amino berkelakuan penuh sebagai asam dan dapat dititrasi secara alkalimetri.

13 Prosedur : Campurant=0t =15t=30t=45t=60 Gelatin 5%5 ml Tripsin 1%2 ml Inkubsi 38 0 C 0 menit15 menit30 menit45 menit60 menit Tuang masing-2 kedalam erlenmayer + formol 15 ml aduk rata tambah 3 tt ind. pp. Titrasi dengan NaOH 0,02 N ad warna tepat pink Hitung kadar protein 13

14 (Vt – Vo) NaOH x 2, 8 % Nitrogen AA = x 100% =.... mg/100 ml lar. gelatin ml gelatin • Hitung % nitrogen asam amino dengan rumus : • Buat kurva hubungan lama waktu inkubas vs % nitrogen asam amino

15 15 Pengaruh temperatur : Makin tinggi temperatur Makin mudah rusak Enzim lebih stabil pada Temperatur yang rendah Pengaruh Suhu Inkubasi terhadap Aktivitas Enzim amilase

16 Prosedur CampuranVol mlBlangko (1) Suhu 0 C selama 20 menit Amilum 1%2,0 mlAqua 1.0ml 2,0 ml Amilase1,0 ml Dapar1,0 ml Tabung masukkan dalam air mendidih 10 menit dinginkan dan tambah 1 ml pereaksi lar. CuSO 4 alkalis dan 1 ml diaduk rata, tunggu 10 menit Encerkan sampai tepat dalam labu takar 10.0 ml Baca absorbansinya pd λ 580 nm. 16

17 Absorbansi sampel – Absorbansi blanko Aktivitas Enzim (v) = Waktu inkubasi Tugas : 1) Tentukan aktivitas enzim dengan rumus : 2) Buat kurva hubungan suhu inkubasi vs aktivitas enzim


Download ppt "2 Dasar Teori Penting untuk :  Memahami fungsi katalitik  Memahami fenomena biologik, pengaruh suhu, pH dll.  Prosedur pemurnian enzim."

Presentasi serupa


Iklan oleh Google