Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

Fumarate hydratase (EC. 4.2.1.2) Amalina Ghaisani Komarudin 10507008 Program Studi Kimia Institut Teknologi Bandung.

Presentasi serupa


Presentasi berjudul: "Fumarate hydratase (EC. 4.2.1.2) Amalina Ghaisani Komarudin 10507008 Program Studi Kimia Institut Teknologi Bandung."— Transcript presentasi:

1 Fumarate hydratase (EC ) Amalina Ghaisani Komarudin Program Studi Kimia Institut Teknologi Bandung

2 Agenda Presentasi Pendahuluan Struktur Fumarase Mekanisme Fumarase Isolasi Fumarase Pemurnian Fumarase Karakterisasi Fumarase Kinetika Fumarase Defisiensi Fumarase

3 Pendahuluan Siklus Krebs

4 Reaksi yang Dikatalisis Reaction: (S)-malate = fumarate + H 2 O

5 Tata nama enzim Fumarase EC 4 : Lyase EC 3.1 : Carbon-Oxygen Lyase EC :Hydro-Lyase Accepted name: Fumarate Hydratase Fumarase (EC ) Hydro Lyase Carbon-Oxygen LyaseLyase

6 Penggolongan Enzim Fumarase FumaraseClass I Fumarase A, Fumarase B Class IIFumarase C Klasifikasi berdasarkan penyusunan subunit, kebutuhan logam dan ketermostabilan. Prokaryot memiliki tiga jenis Fumarase : Fumarase A, Fumarase B dan Fumarase C

7 Struktur Fumarase C dari E.coli Terdiri dari tiga domain, dimana posisi region 1-3 berjauhan Memiliki dua buah dicarboxylate binding site yaitu A site dan B site A site dan B site teridentifikasi memiliki area yang tidak terisi ligan

8 Residu pada sisi aktif Fumarase

9 Mekanisme Enzim Fumarase

10 Isolasi Fumarase Euglena gracilis var. bacillaris E. gracilis + buffer 1 (50 mM triethanolamine-HCl pH malate 10 mM 5 mM EDTA 10 mM 2- mercaptoethanol Diisolasi dari sel yang kekurangan vitamin B- 12 menggunakan metode Trypsin digestion Dimurnikan dengan sentrifugasi gradien densitasFumarase

11 50 g sel Crude extract + 70 mL buffer French pressure cell pada lb/in 2 Sentrifugasi x g selama 30 menit + 70 mL buffer French pressure cell pada lb/in 2 Sentrifugasi x g selama 30 menit Dipanaskan pada suhu 50 o C selama 3,5 menit Sentrifugasi pada x g selama 20 menit Dipanaskan pada suhu 50 o C selama 3,5 menit Sentrifugasi pada x g selama 20 menit Supernatan pH dibuat menjadi 7.8 dengan 2 M triethanolamine Ekstrak enzim Fraksinasi dengan amonium sulfat 40 % dan 60 % Pemurnian Fumarase Euglena gracilis var. bacillaris

12 Hasil fraksinasi Supernatan Dialisis dengan bufer selama 3 jam Sentrifugasi Dialisis dengan bufer selama 3 jam Sentrifugasi Ditambah NADH, NAD +, NADPH, NADP + Kromatografi afinitasMatrix gel Orange A Karakterisasi Fumarase Pemurnian Fumarase Euglena gracilis var. Bacillaris (lanjutan)

13 Karakterisasi Fumarase + 2 mL 50 mM potassium phospate + 50 mM malat Diukur serapan pada 250 nm( 1 Unit enzim = 1  mol fumarat/menit) Aktifitas enzim SDS-PAGE (gel 10%) Native-PAGE Berat molekul

14

15 Hasil elektroforesis

16 Parameter kinetika Enzim Fumarase Aktivitas maksimum pada pH 8,4 Km Malat = 0,14 mM Km Fumarat = 0,031 mM ATP merupakan inhibitor Pada 10 mM Tris-acetate (pH 7.3) dan konsentrasi malat= 1 mM, 32,2 mU E. gracilis fumarase terinhibisi 50% oleh 0,35 mM ATP. Aktivitas maksimum pada pH 8,4 Km Malat = 0,14 mM Km Fumarat = 0,031 mM ATP merupakan inhibitor Pada 10 mM Tris-acetate (pH 7.3) dan konsentrasi malat= 1 mM, 32,2 mU E. gracilis fumarase terinhibisi 50% oleh 0,35 mM ATP.

17 Defisiensi Enzim Fumarase Defisiensi fumarase disebabkan oleh mutasi gen yang mengkode fumarase Kekurangan Fumarase menyebabkan ensefalopati, retardasi mental yang berat, fitur wajah yang tidak biasa, kelainan otak, dan serangan epilepsi karena jumlah abnormal rendah fumarase dalam sel. Pola penurunan penyakit ini adalah autosomal resesif

18

19 Referensi Purification, Characterization and Immunological Properties of Fumarase from Euglena gracilis var. Bacilaris. Hitoshi Shibata, William E. Gardiner, Steven D. Schwartzbach. Journal of Bacteriology, Nov. 1985, P The role of the allosteric B site in the fumarase reaction. Irwin A. Rose and Todd M. Weaver. Structure of Free Fumarase C from Escherichia coli. Todd Weaver. Acta Cryst. (2005). D

20 SEKIAN DAN TERIMA KASIH


Download ppt "Fumarate hydratase (EC. 4.2.1.2) Amalina Ghaisani Komarudin 10507008 Program Studi Kimia Institut Teknologi Bandung."

Presentasi serupa


Iklan oleh Google