Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

OLEH : INA RISTIAN (G451130301) DEWI PRATIWI (G451130091) FATAN UMBARA (G451130281) NURIKHSAN FISTORO (G451130011) FAHMI HASIM (G451140346) Acetylcholinesterase.

Presentasi serupa


Presentasi berjudul: "OLEH : INA RISTIAN (G451130301) DEWI PRATIWI (G451130091) FATAN UMBARA (G451130281) NURIKHSAN FISTORO (G451130011) FAHMI HASIM (G451140346) Acetylcholinesterase."— Transcript presentasi:

1 OLEH : INA RISTIAN (G ) DEWI PRATIWI (G ) FATAN UMBARA (G ) NURIKHSAN FISTORO (G ) FAHMI HASIM (G ) Acetylcholinesterase Inhibition Assay

2 Asetilkolinesterase Berperan penting Saraf Pusat Perifer Reseptor Asetilkolin Saraf-saraf dan Sinapsis Neuromuskular

3 EnzimTugas Fisiologis Penghambatan hidrolitik dari neurotransmiter kationik

4 Asetilkolinesterase Target yang menarik untuk desain rasional Penemuan mekanisme penghambatan Inhibitor Asetilkolinesterase Alzaimer Dimensia Pikun Ataksia Meningkatkan proses memori jangka panjang dengan meningkatkan aktivitas kolinergik

5 Mekanisme inhibisi enzim Acetylcholinesterase

6 Spectrophotometric Assay Bahan-bahan : Buffer fosfat 1 (0.1 M, pH 8.0) Buffer fosfat 2 (0.1 M, pH 7.0) Buffer Reagen Ellman, DTNB Asetilkolin Iodida, 75 mmol/L Asetilkolinesterase (AChE) Mikropipet Pipet gelas Stop watch Water bath Spektrofotometer UV-Vis Sampel Uji (ekstrak yang belum murni, produk alam, senyawa sintetik)

7 Buffer Fosfat-1 (For enzyme and test) 1.56 g Na 2 HPO 4.2H 2 O NaOH 100 mmol/L hingga pH = 8, T = 25 0 C Aquades hingga 100 ml Preparasi Reagen Larutan buffer akan stabil selama tidak ada kontaminasi dari mikroba + H 2 O 75 mL larutkan Simpan temperatur 4 0 C

8 Buffer Fosfat -2 (For Ellman’s reagent, DTNB) Preparasi Reagen Larutan buffer akan stabil selama tidak ada kontaminasi dari mikroba 1.56 g Na 2 HPO 4.2H 2 O NaOH 100 mmol/L hingga pH = 7, T = 25 0 C Aquades hingga 100 ml + H 2 O 75 mL larutkan Simpan temperatur 4 0 C

9 Reagen Buffer Ellman (DTNB, 0.1M/1; NaHCO3,17.85 mmol/l) Preparasi Reagen Larutan ini dapat bertahan selama 4 minggu setelah dibuat 39.6 mg DTNB + 10 mL lar. Buffer fosfat-2 larutkan + 15 mg NaHCO3 Simpan pada temperatur 4°C.

10 Acetylthiocholine iodide (75 mmol/l) (Substrate) Preparasi Reagen Larutan ini dapat bertahan selama 7 hari setelah dibuat mg acetylthiocholine iodide + dalam 5 ml akuabides larutkan Simpan pada temperatur 4°C.

11 Acetylcholinesterase (Enzyme) Enzim dilarutkan dalam buffer-1 hingga konsentrasi campuran menjadi 0,00025U/ml Simpan dalam water bath dengan temperatur 5°C. Preparasi Reagen

12 Preparasi Sampel 10 mg sampel+ DMSO larutkan ditera hingga 5 mL Larutan stok 2000 ppm Pembuatan deret konsentrasi V 1.M 1 = V 2.M ; 31.25; 62.50; 125; 250; 500; dan 1000 ppm 5 mL

13 Pengujian Larutan Sampel acetylcholinestrase inhibition assay 2.80 ml lar. buffer fosfat μl lar. sampel + 30 μl larutan stok enzim μl larutan stok DTNB Inkubasi 5-10 menit, suhu 25 0 C + 30 μl larutan stok subtrat Ukur pada ʎ = 412 nm

14 7 deret konsentrasi sampel, masing-masing 3 ulangan Blangko masing-masing 2 ulangan Keterangan: S1 = Sampel 1 S2 = Sampel 2 Kp = Kontrol positif (eserin) Kn = Kontrol negatif B0 = Blangko dari Kp dan Kn (bufer fosfat 1 + DTNB + substrat) B1 = Blangko dari sampel 1 (bufer fosfat 1 + sampel 1 + DTNB + substrat) B2 = Blangko dari sampel 2 (bufer fosfat 1 + sampel 2 + DTNB + substrat) s1 B1 s2 B2 Kp Kn Kp Kn B0

15 Kurva Hubungan Antara Konsentrasi Inhibitor Dengan Aktivitas Enzim

16 Ilustrasi acetylcholinestrase inhibition assay DTNB Acetylthiocholine iodide Acetylcholinesterase Buffer Fosfat-1 larutan sampel Inkubasi 5-10 menit pada suhu 25 0 C Kemudian dianalisis pada panjang gelombang 412 nm

17 Terima kasih


Download ppt "OLEH : INA RISTIAN (G451130301) DEWI PRATIWI (G451130091) FATAN UMBARA (G451130281) NURIKHSAN FISTORO (G451130011) FAHMI HASIM (G451140346) Acetylcholinesterase."

Presentasi serupa


Iklan oleh Google