Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

Mutasi Gen embB Isolat Klinis L16 dan L21 Multidrug Resistant Mycobacterium tuberculosis Icha Isana Febriana / 10506067 Pembimbing : Achmad Saifuddin Noer,

Presentasi serupa


Presentasi berjudul: "Mutasi Gen embB Isolat Klinis L16 dan L21 Multidrug Resistant Mycobacterium tuberculosis Icha Isana Febriana / 10506067 Pembimbing : Achmad Saifuddin Noer,"— Transcript presentasi:

1 Mutasi Gen embB Isolat Klinis L16 dan L21 Multidrug Resistant Mycobacterium tuberculosis Icha Isana Febriana / Pembimbing : Achmad Saifuddin Noer, Ph.D 7 April 2015of 211 Seminar Tugas Akhir

2 AGENDA PRESENTASI 7 April 2015 of 21 2 PENDAHULUAN METODE PENELITIAN HASILPEMBAHASANKESIMPULAN Seminar Tugas Akhir

3 PENDAHULUAN Mycobacterium tuberculosis (M. tb) adalah bakteri penyebab tuberkulosis (TB) pada manusia Setiap tahun, TB menginfeksi 9 juta jiwa dan membunuh 1,5 juta jiwa di dunia (WHO, 2008) Salah satu faktor meningkatnya infeksi TB di dunia disebabkan oleh mutasi M. tb di tingkat genotipe 7 April 2015 of 21 3 Seminar Tugas Akhir

4 Mycobacterium tuberculosis M. tb adalah bakteri patogen utama yang menyerang sistem pernafasan mamalia Bakteri M. tb berbentuk basil (batang) dan bersifat tahan asam Bakteri ini mampu bertahan beberapa jam di tempat gelap, lembab, dan dapat bersifat dormant (tidur) di dalam tubuh manusia. 7 April 2015of 214 Seminar Tugas Akhir

5 Peta Genom M. tb Genom M.tb berukuran 4,4 x 10 6 pb dan memiliki >> 4000 gen Operon embCAB  10 kb 7 April 2015of 215 [http://wishart.bi ology.ualberta.c a/BacMap/graph s_cgview.html] Seminar Tugas Akhir

6 Tuberkulosis Tuberkulosis adalah salah satu penyakit mematikan (www.TBCindonesia.or.id) 7 April 2015of 216 Seminar Tugas Akhir

7 Obat Anti Tuberkulosis OAT yang tersedia untuk menangani TB terdiri dari 2 jenis : a. lini pertama : isoniazid, rifampisin, pirazinamid, etambutol dan streptomisin b. lini kedua : etionamid, kanamisin, quinolones, dll. Etambutol bekerja dengan cara menghalangi pembentukan dinding sel bakteri 7 April 2015of 217 Seminar Tugas Akhir Struktur Etambutol

8 Etambutol Sasaran etambutol adalah protein arabinosiltransferase yang dikode oleh gen embB pada operon embCAB gen embB memiliki ukuran 3297 pb Diketahui bahwa sebagian besar mutasi yang mengakibatkan resistensi terhadap etambutol terjadi pada kodon 306 dari gen embB (Sreevatsan dkk., 1997) 7 April 2015of 218 Seminar Tugas Akhir

9 Diagram Alir Penelitian 7 April 2015 of 21 9 Koleksi Isolat MDR-M. tb Pemilihan Sampel Isolat L16 dan L21 Amplifikasi fragmen gen embB dengan PCR Elektroforesis Gel Agarosa Amplifikasi Berhasil Urutan Nukleotida Fragmen Gen embB SequencingAnalisis In Silico Data Seminar Tugas Akhir Isolat M. tb Koleksi Laboratorium Biokimia, ITB Kode L : BPLK ; Kode R : RS. Rotinsulu, Bandung Sampel L16 :Mutasi C1594T pada gen rpoB (Ser  Leu) (Noviana, 2007) Sampel L21 :Mutasi pada gen katG294  T884C (mutasi bisu) (Noviana, 2007) Mutasi C1594T pada gen rpoB (Ser  Leu) (Noviana, 2007)

10 Metode Penelitian Pembuatan master mix PCR Amplifikasi fragmen gen embB dengan kondisi PCR yang telah ditentukan PCR Pembuatan gel agarosa (agarosa, TAE 1x, EtBr) λ = 312 nm, dengan marker pUC19/HinfI ELEKTROFORESIS GEL AGAROSA Metode dideoksi Sanger dan mengikuti prosedur BigDye  Terminator oleh Macrogen Inc., Korea SEQUENCING Analisis in silico menggunakan program EditSeq  dan SeqMan  dari DNASTAR versi ANALISIS IN SILICO 7 April 2015of 2110 Seminar Tugas Akhir

11 Polymerase Chain Reaction 7 April 2015of 2111 Seminar Tugas Akhir

12 Kondisi PCR 7 April 2015of ,0 ˚ 72,0 ˚ 4,0 ˚ 5,00 1,00 4,00  Seminar Tugas Akhir

13 Posisi Penempelan Primer Urutan primer yang digunakan (Clemente dkk., 2008): embF : 5’ – GGTGCGCGCCATGCCACC – 3’ ( ) embR : 5’ – GGTCTGGCAGGCGCATCC – 3’ ( ) Posisi Penempean Primer 7 April 2015of ’ 3’ embF embR 0,8 kb Seminar Tugas Akhir

14 HASIL : Pita Elektroforesis Isolat L16Isolat L21 7 April 2015of 2114 pUC19/H inf I (-) H37Rv (+) L16 pUC19/H inf I L21 H37Rv (+) (-) ,8 kb Seminar Tugas Akhir

15 Elektroforegram Isolat L16 7 April 2015of 2115 Seminar Tugas Akhir

16 Analisis Hasil Sequencing Isolat L16 Isolat L16 7 April 2015of 2016 Seminar Tugas Akhir

17 Analisis Hasil Sequencing Isolat L21 7 April 2015of 2117 Seminar Tugas Akhir

18 Terjemahan Ke “Bahasa” Protein 7 April 2015of 2118 Seminar Tugas Akhir

19 PEMBAHASAN Pada isolat L16, tidak terdapat mutasi di kodon 306 dari gen embB. Sifat resistensi etambutol dapat melibatkan beberapa gen lain, selain embB (Telenti dkk., 1997). Clemente (2008) : hanya 70% dari keseluruhan EMB resisten menunjukkan mutasi embB 7 April 2015of 2119 Seminar Tugas Akhir

20 PEMBAHASAN Pada isolat L21, perubahan urutan nukleotida pada kodon 306 : ATG  GTG Kodon 306 dan sekitarnya menjadi lebih hidrofob. Hal inilah yang diduga menjadi penyebab EMB sulit terikat dan tidak mampu menginhibisi pembentukan dinding sel bakteri. 7 April 2015of 2120 Seminar Tugas Akhir

21 KESIMPULAN Sifat resistensi M. tb terhadap etambutol tidak selalu akibat adanya mutasi pada kodon 306. Kodon 306 merupakan hot spot penyebab resistensi etambutol. Daerah kodon 306 dapat digunakan untuk pengembangan diagnostik kit untuk deteksi M. tb yang resisten etambutol 7 April 2015of 2121 Seminar Tugas Akhir


Download ppt "Mutasi Gen embB Isolat Klinis L16 dan L21 Multidrug Resistant Mycobacterium tuberculosis Icha Isana Febriana / 10506067 Pembimbing : Achmad Saifuddin Noer,"

Presentasi serupa


Iklan oleh Google