Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

AGENDA PRESENTASI PENDAHULUAN TATA NAMA ENZIM STRUKTUR ISOLASI PEMURNIAN MEKANISME KINETIKA INHIBISI.

Presentasi serupa


Presentasi berjudul: "AGENDA PRESENTASI PENDAHULUAN TATA NAMA ENZIM STRUKTUR ISOLASI PEMURNIAN MEKANISME KINETIKA INHIBISI."— Transcript presentasi:

1

2 AGENDA PRESENTASI PENDAHULUAN TATA NAMA ENZIM STRUKTUR ISOLASI PEMURNIAN MEKANISME KINETIKA INHIBISI

3 PENDAHULUAN Gliserol : produk metabolisme jaringan adiposa (glukoneogenesis) Hanya dapat digunakan oleh jaringan yang memiliki enzim pengaktifnya yaitu : GLISEROL KINASE GLISEROL

4 E.C Nama sistematik : ATP: glycerol-3-phosphotransferase Nama trivial : Gliserol kinase TATA NAMA ENZIM Kelas transferase Sub kelas fosfotransferase Sub sub kelas fosfotransferase Nama dari GK

5 Struktur domain dan daerah tempat berikatannya efektor pada GK Tempat berikatannya ADP & gliserol STRUKTUR Sumber : Eschericia coli Protein oligomer yang tetramer (terdiri dari 4 subunit yang identik). Daerah aktifnya mengandung ADP dan gliserol pada satu unitnya. Berat molekul enzim : 217,000 Berat molekul subunit : 55,000

6 Ikatan hidrogen Ikatan van der waals Ikatan Mg 2+ Hidrolisis ATP TOPOLOGI STRUKTUR

7 ISOLASI starter (kultur pH 7,0) Dipindahkan ke medium 100 L dalam fermentor (37 o C, 5 kubik feet/min, 8-12 jam) Kultur dipindah ke bak dingin yang berisi sel yang dipanen dengan Sharples sentrifuga Sel dicuci dengan buffer standar pH 7,0 (4 o C) Berat bersih (745 g) pemurnian Karakteristik protein

8 Sel 745 gr (4 o C) disuspensi dalam 2 ml buffer Homogenat disentrifuga 20 min ( x g) Ultrasentrifug a ( x g, 1 jam) Suspensi diaduk semalam Presipitat dihilangkan dgn sentrifugasi ( x g, 30 min), supernatan difraksinasi dgn (NH4) 2 SO4 Fraksi (NH4) 2 SO4 didilusi dgn buffer 0,1 M KCl (36 jam) ke kolom DEAE-selulosa (500 ml) Protein dielusi dgn 1650 ml buffer 0,1 M KCl (mixing chamber) & 1650 ml buffer 0,25 M KCl (reservoir) Konsentrat (NH4) 2 SO4 didilusi dalam kolom Sephadex-200 dengan buffer Diawasi dgn ultraviolet analyzer 280 nm Elektroforesis 2-D (gradien pH) PEMURNIAN

9

10 MEKANISME Reaksi aktivitas gliserol dengan gliserol kinase Transfer fosfat dari ATP

11 KINETIKA

12 INHIBISI GK terinhibisi secara alosterik oleh fruktosa bifosfat (FDP). Inhibisi dengan FDP  nonkompetitif PENGENDALIAN INHIBISI Inhibisi gliserol kinase oleh FDP dapat direduksi dengan: 1. memanipulasi kondisi ioniknya 2. dilakukan mutasi

13 1. Manipulasi kondisi ionik : menggunakan garam (misal: KCl) konsentrasi tinggi  menurunkan sensitivitas dan stimulasi terhadap FDP. Pengaruh KCl terhadap reaksi gliserol kinase Pengaruh garam lain terhadap reaksi gliserol kinase 2. Dilakukan mutasi

14


Download ppt "AGENDA PRESENTASI PENDAHULUAN TATA NAMA ENZIM STRUKTUR ISOLASI PEMURNIAN MEKANISME KINETIKA INHIBISI."

Presentasi serupa


Iklan oleh Google