PENDAHULUAN MEKANISME REAKSI ISOLASI DAN PEMURNIAN DEFESIENSI PC
Pyruvate carboxylase (PC) memiliki nomor enzim Piruvat karboksilase adalah enzim dari kelas ligase yang mengkatalisis karboksilasi piruvat membentuk oksaloasetat (OAA).
PC merupakan enzim allosterik yang diaktifkan oleh efektornya yakni Asetil-CoA PC mengandung ion Mn2+ yang terikat kuat dan gugus prostetik yang terikat secara kovalen yakni biotin PC berbentuk tetramer yang terdiri atas 4 subunit yaitu BC (biotin carboxylase), CT (carboxytransferase), BCCP (biotin-carboxy carrier protein), dan PT (PC tetramerization)
Mekanisme reaksi di atas terjadi dua tahap reaksi parsial
Mekanisme Ping Pong Bi Bi Uni Uni
PC disubklon dari Staphylococcus aureus dalam vektor pET28a kemudian diekpresikan pada E. coli. Sel yang mengekspresikan PC kemudian dimurnikan dengan : 1. Pestle & Mortar (dengan N2 cair) 2. Centrifuge 3. Dialisis / Kromatografi Penukar Ion Aktivitas PC dianalisis dengan SDS-PAGE dan spektrofotometer Massa
Kekurangan karboksilase piruvat merupakan gangguan bawaan yang menyebabkan asam laktat dan senyawa beracun lainnya yang berpotensi untuk terakumulasi dalam darahasam laktatdarah Ada dua jenis kekurangan PC berdasarkan tingkat keparahannya: 1. tipe 1: terjadi penumpukan asam laktat dalam darah (asidosis laktit) 2. tipe 2 : terjadi penumpukan amonia dalam darah (hiperamonemia)
Terima Kasih