UJI AKTIVITAS ENZIM PROTEOLITIK

Presentasi berjudul: "UJI AKTIVITAS ENZIM PROTEOLITIK"— Transcript presentasi:

1 UJI AKTIVITAS ENZIM PROTEOLITIK

2 Enzim Proteolitik Enzim proteolitik  tergolong dalam enzim hidrolitik (peptida hidrolase). Enzim ini dipakai dalam produksi keju, bir, pelunakan daging, dan modifikasi sifat-sifat protein sereal dalam pembuatan roti dan produk sereal lain.

3 Spesifisitas substrat untuk enzim proteolitik diantaranya adalah:
A. Sifat R1 dan R2 Kebutuhan spesifik terhadap sifat R1 dan/atau R2 dapat digunakan untuk membedakan enzim proteolitik. -kimotripsin menghidrolisis ikatan peptida dengan cepat hanya jika R1 merupakan rantai sisi berupa residu tirosil, fenilalanil, atau triptofanil.

4 B. Konfigurasi Asam Amino
Spesifisitas enzim proteolitik juga harus dikontribusi oleh kongfigurasi asam amino, yaitu dalam konfigurasi-L. Kadang-kadang residu asam amino-D berikatan pada sisi aktif , tetapi ikatan peptida tidak terhidrolisis. C. Ukuran Senyawa khususnya untuk protease aspartat,

5 D. Sifat X dan Y Kebutuhan enzim terhadap X dan Y sebagai gugus hidrogen dan hidroksil atau untuk menentukan sifat enzim sebagai endopeptidase atau eksopeptidase. E. Kebutuhan terhadap Ikatan Peptida Ikatan peptida dapat digantikan dengan gugus amida (-NH2), ester (-COOR), tiolester (-COSR), atau hidroksamat (-CONHOH).

6 Bahan : enzim papain susu skim formaldehid aquades indikator pp NaOH 0,1 N

7 Alat : Water bath Buret neraca analitik erlenmeyer gelas ukur 50 ml pipet volume 10 ml gelas beker 250 ml pengaduk pipet tetes

8 Preparasi sampel Buat larutan susu skim 5%.
Buat larutan enzim papain konsentrasi 20, 30 dan 40% Siapkan 4 erlenmeyer, isi masing-masing dengan 40 ml larutan susu skim, masukkan 3 erlenmeyer dalam waterbath suhu 37 C(kira-kira 10 menit). Erlenmeyer yang satu tidak perlu dimasukkan dalam water bath (untuk perlakuan kontrol/blangko)

9 Prosedur Masukkan masing masing ke dalam erlenmeyer 10 ml larutan enzim dengan konsentrasi yang berbeda. Untuk perlakuan kontrol/blangko tidak ditambah enzim tetapi di tambah 10 ml akuades ( dan tidak perlu di inkubasi). Ketiga erlenmeyer diinkubasi pada suhu 37 C selama 1 jam. Sesudah itu ambil 10 ml sampel tambah dengan 2 ml formaldehid , tambah indikator pp 3 tetes, lalu titrasi dengan 0,1 N NaOH

10 RUMUS % N = (ts-tb) ml x N NaOH x 14,008 x FP x100%
ts = titrasi sampel tb = titrasi blanko berat sampel = berat susu skim dalam gram FP = Faktor pengenceran , jika sesuai dengan prosedur maka FP = 50/10= 5 % N = (ts-tb) ml x N NaOH x 14,008 x FP x100% berat sampel (g) x 1000