POTENSI BARU PENGHASIL SENYAWA ANTIMIKROBIAL DARI BAKTERI FILOSFER DAUN REUNDEU (Staurogyne longata)

Presentasi berjudul: "POTENSI BARU PENGHASIL SENYAWA ANTIMIKROBIAL DARI BAKTERI FILOSFER DAUN REUNDEU (Staurogyne longata)"— Transcript presentasi:

1 POTENSI BARU PENGHASIL SENYAWA ANTIMIKROBIAL DARI BAKTERI FILOSFER DAUN REUNDEU (Staurogyne longata)

2

3 Pendahuluan Tanaman reundeu biasa digunakan sebagai lalapan oleh sebagian masyarakat Sunda Tanaman ini juga bermanfaat sebagai tanaman obat Tanaman lalapan dikonsumsi tanpa dimasak

4 Telah diketahui bahwa di permukaan daun reundeu hidup beberapa mikroorganisme yang bermanfaat, termasuk bakteri filosfer penghasil senyawa antimikrob Apakah bakteri filosfer reundeu menghasilkan senyawa antimikrob terhadap mikroba patogen.

5 Tujuan Mengetahui aktivitas antimikrob bakteri filosfer reundeu terhadap mikroba patogen serta konsentrasi penghambatan minimalnya terhadap mikroba patogen.

6 Isolasi Bakteri Filosfer Reundeu
Metode Penelitian Isolasi Bakteri Filosfer Reundeu 1ml 1ml 1ml 1ml 10ml 9ml 9ml 9ml 9ml Divorteks { 10 -1 10 -2 10 -3 10 -4 0,1ml 0,1ml 0,1ml Inkubasi 24 jam King’s B Media 10 -3 King’s B Media 10 -4 King’s B Media 10 -5

7 Pemurnian Isolat 61 isolat bakteri filosfer Inkubasi 24 jam
Uji Gram 31Gram positif 30 Gram negatif

8 Digores dengan isolat bakteri filosfer reundeu
Uji Antimikrob + Digores dengan isolat bakteri filosfer reundeu Media NA Semi Padat NB &bakteri antagonis + Inkubasi 24 jam Media NA Padat Mikroba yang digunakan dalam uji antibakteri : Enteropatogenik Escherichia coli (EPEC) Staphylococcus aureus Candida albicans Candida tropicalis

9 Digores dengan isolat bakteri filosfer reundeu
Uji Patogenisitas Blood agar Digores dengan isolat bakteri filosfer reundeu Inkubasi 24 jam

10 Uji MIC (Minimum Inhibitory Concentration)
Sentrifugasi 10000rpm 15 menit dipindahkan Kultur isolat dalam 50 ml media diinkubasi 24 jam 6,25% 12,5% 25% 50% 100% Inkubasi selama 24 jam

11 { Amati Tentukan MIC Inkubasi 24 jam (Wallace et al. 1986)
Diukur pertumbuhan bakteri dengan spektrofotometer Tentukan MIC 0,1ml 0,1ml 0,1ml 0,1ml 1ml 0,9ml 0,9ml 0,9ml 0,9ml { 10 -1 10 -2 10 -3 10 -4 0,1ml 0,1ml 0,1ml Inkubasi 24 jam Media NA/PDA 10 -3 Amati Media NA/PDA 10 -4 Media NA/PDA 10 -5 (Wallace et al. 1986) Baktericidal/ Fungicidal Bakteriostatik/ Fungistatik

12 Isolasi Genom Bakteri (Metode CTAB)
Inkubasi: 370C, 30’ Kultur bakteri 1.5 mL TE 1x 1.5 mL + 5μL lisozim rpm, 10’ + etanol 70% + SDS 10% + ddH2O Inkubasi dlm freezer, 24 jam rpm, 10’ rpm, 10’ Isolasi Genom Bakteri (Metode CTAB) NaCl + CTAB Pindahkan ke eppendorf baru, + etanol absolut + CI 650 μL + PCI 650 μL rpm, 10’ rpm, 10’

13 PCR (Polimerase Chain Reaction)
(Marchesi et al. 1998) Komposisi Bahan PCR untuk 1 isolat : Buffer GC μL La Taq μL Primer 63 f μL Primer 1387 R μL dNTPs μL ddH2O μL DNA template μL

14 PCR (Polimerase Chain Reaction)
Resep mix untuk 5 tube : Buffer GC μL La Taq μL Primer 63 f μL Primer 1387 R μL dNTPs μL ddH2O μL Yang kami lakukan adalah amplifikasi gen pengkode 16S rDNA

15 Bagi mix ke empat tabung lain
Tambahkan DNA template masing-masing 2 μL Letakkan ke dalam mesin PCR Jalankan sebanyak 30 siklus elektroforesis

16 Hasil Uji Gram, Uji Antibakteri dan Uji Patogenisitas
No Tabung Kode isolat Gram Uji Antimikrob Uji Patogenisitas EPEC S. aureus C. albicans C. tropicalis 1 FR1  - - 2 FR2  + + 3 FR3 4 FR4 5 FR5 6 FR6 7 FR7 8 FR8 9 FR9 10 FR10 11 FR11 12 FR12 13 FR13 14 FR14 15 FR15

17 No Tabung Kode isolat Gram Uji Antimikrob Uji Patogenisitas EPEC
S. aureus C. albicans C. tropicalis 16 FR16  - - + 17 FR17  + 18 FR18 19 FR19 20 FR20 21 FR21 22 FR22 23 FR23 24 FR24 25 FR25 26 FR26 27 FR27 28 FR28 29 FR29 30 FR30

18 No Tabung Kode isolat Gram Uji Antimikrob Uji Patogenisitas EPEC
S. Aureus C. albicans C. tropicalis 31 FR31 + - 32 FR32 33 FR33 34 FR34 35 FR35 36 FR36 37 FR37 38 FR38 39 FR39 40 FR40 41 FR41 42 FR42 43 FR43 44 FR44 45 FR45

19 No Tabung Kode isolat Gram Uji Antimikrob Uji Patogenisitas EPEC
S. aureus C. albicans C. tropicalis 46 FR46 - 47 FR47 + 48 FR48 49 FR49 50 FR50 51 FR51 52 FR52 53 FR53 54 FR54 55 FR55 56 FR56 57 FR57 58 FR58 59 FR59 60 FR60 61 FR61

20 Jumlah isolat antibakteri
Hasil Uji Antibakteri Antibakteri Isolat Gram Positif Isolat Gram Negatif Jumlah isolat antibakteri EPEC 3 2 5 S. aureus 7 10 C. albicans 6 8 14 C. tropicalis 1

21 Konsentrasi Anti Mikrob
Hasil MIC terhadap Cendawan Patogen (Nilai Absorbansi) Konsentrasi Anti Mikrob Isolat 6,25% 12,5% 25% 50% 100% FR3 0,200 0,534 0,754 FR5 0,248 0,151 0,086 FR11 0,372 0,031 0,319 0,860 0,801 FR40 (C.a) 0,988 0,908 0,836 0,303 1,026 FR40 (C.t) 0,894 0,953 1,044 0,961 0,913 kontrol C. albicans : 0,765 kontrol C. tropicalis : 0,142

22 Isolat MIC Pengenceran Jumlah Koloni Fungisida/ Fungistatik Kontrol C. albicans 10-3 TBUD - 10-4 FR3 6,25% Fungisida FR5 85,5 Fungistatik 9 FR11 FR40 50% 288 229

23 Konsentrasi Anti mikrob
Hasil MIC terhadap Bakteri Patogen (Nilai Absorbansi) Konsentrasi Anti mikrob Isolat 6,25% 12,5% 25% 50% 100% FR3 0,668 0,677 0,608 0,514 2.288 FR5 0,533 0,567 0,636 0,419 FR11 0,577 0,587 0,600 0,571 0,388 FR17 (EPEC) 0,548 0,520 0,529 0,453 FR17 (S.a) 0,449 0,474 0,468 0,666 0,349 kontrol EPEC : 0,663 kontrol S. aureus : 0,569

24 Isolat MIC Pengenceran Jumlah Koloni Bakteriosida/ Bakteriotatik Kontrol EPEC 10-3 TBUD - 10-4 S. aureus FR3 25% Bakteriostatik FR5 6,25% FR11 FR17 FR17 S.a 6,25

25 PCR 16s rDNA 1500 bp 1300 bp 1000 bp FR40 FR17 FR11 FR5 FR3 DNA marker

26 Kesimpulan Hasil uji antimikrob menunjukkan bahwa terdapat 5 isolat filosfer reundeu yang menghasilkan antimikrob terhadap EPEC, 10 isolat terhadap S. aureus, 14 isolat terhadap C. albicans dan 1 isolat terhadap C. tropicalis. Selain antimikrob, terdapat 2 isolat filosfer reundeu yang bersifat patogen dari uji patogenisitas. Hasil uji MIC menunjukkan nilai penghambatan yang berbeda-beda. Visualisasi hasil PCR 16s rDNA menunjukkan konsentrasi sekitar 1300 bp.

27 SELESAI Terima kasih…..