Seminar Hasil Praktikum BIOTEKNOLOGI KELAS C. Shofiatul Izzah Al Amaliyah Elsa Mutiara Samti Nitta Cahyaningrum Inas Yumna Mahirah

Presentasi berjudul: "Seminar Hasil Praktikum BIOTEKNOLOGI KELAS C. Shofiatul Izzah Al Amaliyah Elsa Mutiara Samti Nitta Cahyaningrum Inas Yumna Mahirah"— Transcript presentasi:

1 Seminar Hasil Praktikum BIOTEKNOLOGI KELAS C

2 Shofiatul Izzah Al Amaliyah1722-055 Elsa Mutiara Samti1722-107 Nitta Cahyaningrum1722-113 Inas Yumna Mahirah1722-114 Parohon Andronikus Pasaribu1722-122 Nilam Ardiningtyas1722-162 SHIFT E-2

3 Alief Aulia Rochmaniah1722-041 Octavia Firstyanasari Amira1722-048 Emi Dewi Rahmawati1722-050 Mutiara Dewi Parisa Kinanti1722-053 Nimas Putri Ariyanti B1722-119 Ima Zahrotul A1722-151 Erna Putri Illiyin1722-160 SHIFT F-2

4 D N_ A PENETAPAN KADAR DNA BIOTEKNOLOGI KELAS C

5 Escherichia coli pET 30b PENETAPAN KADAR DNA Dilakukan dengan spektrofotometer sebab adanya gugus basa purin dan basa pirimidin yang mampu menyerap cahaya UV pada Panjang gelombang 260 nm, sedangkan kontaminan protein dan fenol pada 280 nm. Nilai Kemurnian 1,8-2,0

6 TUJUAN PRAKTIKUM Mahasiswa mampu menentukan kadar DNA menggunakan spektrofotometer Mahasiswa mampu menentukan kemurnian dna hasil isolasi

7 ALAT MIKROPIPET KUVET MIKROTIP SPEKTROFOTOMET ER BAHAN DNA hasil isolasi ddH2O Buffer TE ALAT DAN BAHAN

8 HASIL PENETAPAN KADAR DNA

9 SampelA260A280 Kadar DNA (µg/µl) Kemurnia n DNA Kesimpulan F1Kromosom0,2680,16126801,6770 Kontaminan fenol/protein Plasmid0,8410,16584401,8193Murni Blanko: 1000 µL 260 nm Dipipet 5 µL DNA + 995 µL Aquabidest 1 Abs260nm = 50 μg DNA Blanko: 1000 µL 260 nm Dipipet 5 µL DNA + 995 µL Aquabidest 1 Abs260nm = 50 μg DNA DNA kromosom > DNA plasmid Kedua DNA Kontaminan Fenol/Protein DNA kromosom < DNA plasmid DNA Kromosom kontaminan Fenol/Protein SampelA260A280Kadar DNA (µg/µl) Kemurnian DNA Kesimpulan E1-kromosom 0.2840.19428401.4639Kontaminan Fenol/Protein E1-Plasmid-0.004-0.003-401.333Kontaminan Fenol/Protein

10 SampelA260A280 Kadar DNA (µg/µl) Kemurnia n DNA Kesimpulan F1Kromosom0,2680,16126801,6770 Kontaminan fenol/protein Plasmid0,8410,16584401,8193Murni Blanko: 1000 µL 260 nm Dipipet 5 µL DNA + 995 µL Aquabidest 1 Abs260nm = 50 μg DNA Blanko: 1000 µL 260 nm Dipipet 5 µL DNA + 995 µL Aquabidest 1 Abs260nm = 50 μg DNA DNA kromosom > DNA plasmid Kedua DNA Kontaminan Fenol/Protein DNA kromosom > DNA plasmid DNA plasmid kontaminan Fenol/Protein SampelA260A280 Kadar DNA (µg/µl) Kemurnia n DNA Kesimpulan F2Kromosom0,2220,11622201,9310Murni Plasmid0,0720,0487201,5416 Kontaminan fenol/protein SampelA260A280 Kadar DNA (µg/µl) Kemurnian DNA Kesimpulan E2-kromosom0.7630.61776301.2366 Konta Fenol/Protein E2-Plasmid0.0060.007600.8571 Konta Fenol/Protein

11 SampelA260A280Kadar DNA (µg/µl) Kemurnian DNA Kesimpulan E1-kromosom 0.2840.19428401.4639Kontaminan Fenol/Protein E1-Plasmid-0.004-0.003-401.333Kontaminan Fenol/Protein Blanko: 1000 µL 260 nm Dipipet 5 µL DNA + 995 µL Aquabidest 1 Abs260nm = 50 μg DNA Blanko: 1000 µL 260 nm Dipipet 5 µL DNA + 995 µL Aquabidest 1 Abs260nm = 50 μg DNA DNA kromosom > DNA plasmid Kedua DNA Kontaminan Fenol/Protein DNA kromosom > DNA plasmid DNA kromosom kontaminan RNA DNA plasmid kontaminan Fenol/Protein SampelA260A280 Kadar DNA (µg/µl) Kemurnian DNA Kesimpulan E3-Kromosom0.6440.49764401.2958Konta Fenol/Protein E3-Plasmid-0.004-0.003-401.331Konta Fenol/Protein SampelA260A280 Kadar DNA (µg/µl) Kemurnia n DNA Kesimpulan F3Kromosom0,0950,0498502,0638kontaminan RNA Plasmid0,3160,20531601,5512 Kontaminan fenol/protein

12 SampelA260A280Kadar DNA (µg/µl) Kemurnian DNA Kesimpulan E1-kromosom 0.2840.19428401.4639Kontaminan Fenol/Protein E1-Plasmid-0.004-0.003-401.333Kontaminan Fenol/Protein Blanko: 1000 µL 260 nm Dipipet 5 µL DNA + 995 µL Aquabidest 1 Abs260nm = 50 μg DNA Blanko: 1000 µL 260 nm Dipipet 5 µL DNA + 995 µL Aquabidest 1 Abs260nm = 50 μg DNA DNA kromosom > DNA plasmid Kedua DNA Kontaminan Fenol/Protein DNA kromosom > DNA plasmid DNA kromosom kontaminan RNA DNA plasmid kontaminan Fenol/Protein SampelA260A280 Kadar DNA Kemurnian DNA Kesimpulan E3-Kromosom0.6440.49764401.2958Konta Fenol/Protein E3-Plasmid-0.004-0.003-401.331Konta Fenol/Protein SampelA260A280 Kadar DNA (µg/µl) Kemurnia n DNA Kesimpulan F3Kromosom0,0950,0498502,0638kontaminan RNA Plasmid0,3160,20531601,5512 Kontaminan fenol/protein SampelA260A280 Kadar DNA (µg/µl) Kemurnian DNA Kesimpulan E4-Kromosom0.3120.23131201.3506Konta Fenol/Protein E-4 Plasmid-0.0010.001-10Konta Fenol/Protein SampelA260A280 Kadar DNA (µg/µl) Kemurnia n DNA Kesimpulan F4Kromosom0,1260,06212602,065kontaminan RNA Plasmid0,1280,07412801,7568 Kontaminan fenol/protein

13 TITIK KRITIS

14 4. URUTAN PELAKSANAAN Langkah- langkah pada saat isolasi harus benar-benar diperhatikan dan tidak boleh ada yang terbalik supaya didapatkan hasil yang maksimal. 1.KEBERSIHAN Alat-alat yang digunakan harus bersih supaya tidak ada kontaminan yang dapat mempengaruhi absorbansi saat di cek menggunakan spektrofotometer 2. PENGGUNAAN MIKROPIPET Penggunaan mikropipet harus benar karena jika penggunaan salah maka akan mempengaruhi volume yang terambil sehingga dapat menyebabkan kadar berbeda dari yang seharusnya. 3. PENGAMBILAN PELET DAN SUPERNATAN Pengambilan pelet saat isolasi DNA harus sangat hati-hati agar pelet tidak ikut terbuang. Begitu pila pengambilan supernatan harus hati-hati dan tidak boleh ada endapan yang ikut terambil.

15 TITIK KRITIS 5. ABSORBANSI PLASMID Pada shift E abs yang didapatkan memiliki nilai (-), hal ini disebabkan karena plasmid yang diisolasi berjumlah sangat sedikit. 7. PROSEDUR ISOLASI YANG BERBEDA DNA KROMOSOMAL Pada shift E biakan yang diambil ialah 1.5 mL sementara shift F 5 mL Sentrifugasi dilakukan selama 10 menit untuk shift F sementara untuk shift E selama 5 menit Untuk mendapatkan pelet sel sentrifugasi hanya dilakukan sebanyak 1x untuk shift F sementara shift E sebanyak 3x Pelet sel yang dicuci dengan PBS steril selanjutnya di sentrifugasi untuk shift E, sementara untuk shift F tidak namun dilakukan resuspensi pada pencucian ke 3 DNA kromosom yang telah di heat stock diresuspensi dengan cara micropippeting dan vortex untuk shift E sementara shift F tanpa di vortex

16 TITIK KRITIS DNA PLASMID Pada shift E biakan yang diambil ialah 1.5 mL sementara shift F 5 mL Sentrifugasi dilakukan selama 10 menit untuk shift F sementara untuk shift E selama 5 menit

17 THANK YOU