Lipase Termostabil dari Bakteri Termofilik Isolat Gedong Songo

Presentasi berjudul: "Lipase Termostabil dari Bakteri Termofilik Isolat Gedong Songo"— Transcript presentasi:

1 Lipase Termostabil dari Bakteri Termofilik Isolat Gedong Songo
Anita Herawati Permana Dr. Fida Madayanti Waganegara 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

2 Agenda Presentasi PENDAHULUAN STRATEGI PENELITIAN HASIL KESIMPULAN
26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

3 PENDAHULUAN Latar Belakang Rumusan Masalah Tujuan 26/05/2010
Seminar Tugas Akhir

4 Latar Belakang (1 dari 3) Aplikatif di Industri 26/05/2010
Seminar Tugas Akhir

5 Proses industri umumnya memerlukan suhu tinggi!!!
Latar Belakang (2 dari 3) PERMASALAHAN: Proses industri umumnya memerlukan suhu tinggi!!! ENZIM KATALIS) (BIO RAMAH KUNGAN LING- REAKSI EFISIEN LEBIH TERARAH ENZIM TERMOSTABIL 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

6 Mampu mempertahankan struktur 3D di suhu tinggi
Latar Belakang (3 dari 3) Mampu mempertahankan struktur 3D di suhu tinggi ENZIM TERMOSTABIL RING OF FIRE!!! MIKROORGANISME TERMOFILIK YTae-13 (Aminin, 2008) 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

7 Ruang Lingkup (1 dari 2) YTae-13 (Rizqi, 2009) YTae-1 YTae-13
26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

8 Ruang Lingkup (2 dari 2) (Rizqi, 2009) 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

9 Tujuan mengisolasi enzim lipase yang diekspresikan oleh YTae-13,
dan mengarakterisasinya 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

10 STRATEGI PENELITIAN 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

11 Strategi Penelitian (1 dari 3)
Isolat YTae-13 # Pembuatan Kurva Pertumbuhan # Pembuatan Kurva Produksi Enzim Kurva Pertumbuhan dan Kurva Produksi Enzim # Penumbuhan Starter # Produksi Enzim # Isolasi Enzim (Panen) Ekstrak Kasar Enzim (EKE) 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

12 Strategi Penelitian (2 dari 3)
Ekstrak Kasar Enzim (EKE) # Fraksinasi Ammonium Sulfat # Dialisis EKE, Enzim Fraksi 0-20% jenuh, Enzim Fraksi 20-40% jenuh, Enzim Fraksi 40-60% jenuh, Enzim Fraksi 60-80% jenuh, Enzim Fraksi % jenuh # Uji Aktivitas Spesifik Fraksi Aktif 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

13 Strategi Penelitian (3 dari 3)
Fraksi Aktif # Elektroforesis Native-PAGE # Perlakuan kejut panas Fraksi Lebih Murni # Zimografi # Karakterisasi Karakter Enzim 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

14 Kondisi Sumber Air Panas Gedong Songo
Mikroorganisme Mikroorganisme: Prokariot Eukariot Arkea Pshycophilic (1-5oC) Mesophilic (20-37oC) Kondisi Sumber Air Panas Gedong Songo Temperatur 82oC pH 6 Kondisi air jernih Hyperthermophilic (>> 120oC) Thermophilic (40 – 100oC) 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

15 YTae-13 Nama Komposisi GSA GSB YT MB TS G
0,15 % yeast dan 0,15 % tripton 0,5 % pepton; 0,25 % yeast; 0,5 % NaCl 0,02 % yeast dan 0,02 % tripton 0,02 % beef extract; 0,02 % pepton; dan 0,01 % NaCl 5 gram/100mL kaldu tauge dan 0,02 % sukrosa 0,1 % glukosa No Strain Kedekatan Relatif 1 2 3 4 5 6 7 8 9 dYTae-1 dYTae-3 dYTae-5 dYTae-13 dYTae-14 dGae-3 dNBae-1 dNBae-1X dNBae-3X Geobacillus sp.E263 Geobacillus thermoleovorans Geobacillus lituanicus BGSCW9A9 Geobacillus vulgivagus CDZ1 Geobacillus thermoleovorans Tl Thermus sp.RH-0401 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

16 Fraksinasi dan Dialisis
26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

17 Aktivitas Spesifik Aktivitas enzim per kadar protein Penentuan
Enzim + Bradford (1 : 3) Penentuan Kadar Protein 595 nm + LIPASE, 15’, 65oC, pH 8 405 nm 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

18 Native-PAGE dan Zimografi
Elektroforesis Gel Poliakrilamid Ukuran besar, muatan positif tinggi muatan positif rendah Ukuran kecil, 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

19 HASIL 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

20 YTae-13 70oC 55oC 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

21 Kurva Pertumbuhan dan Kurva Produksi Enzim (Suhu 70oC)
26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

22 Kurva Pertumbuhan dan Kurva Produksi (Suhu 55oC)
26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

23 Inokulasi ke media produksi, Ekstrak Kasar Enzim (EKE)
Isolasi Enzim Inkubasi 55oC, pH 6,5, 150 rpm (starter) YTae-13 OD 0,5-0,8 (sekitar 13 jam) Inokulasi ke media produksi, Inokulum 10% V/V, Inkubasi 17 jam Sentrifugasi Supernatan: Ekstrak Kasar Enzim (EKE) 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

24 Aktivitas Spesifik Lipase Hasil Fraksinasi
0,753 0,277 0,206 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

25 Native-PAGE M 40 - 60 20- 20 80 100 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

26 Aktivitas Spesifik setelah Perlakuan Kejut-Panas
26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

27 YTae-13 dapat mengekspersikan lipase lebih dari satu kali selama fasa hidupnya.
Setelah dilakukan fraksinasi dan dialisis terhadap enzim lipase puncak ketiga, aktivitas spesifik tertinggi ditunjukkan oleh fraksi ammonium sulfat 0-20% jenuh. Perlakuan kejut-panas membuat kemurnian enzim meningkat dengan tersingkirkannya enzim-enzim non-termostabil. KESIMPULAN 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

28 REFERENSI Lee, Dong-Woo, et. al Isolation and Characterization of a Thermophilic Lipase from Bacillus thermoleovorans ID-1. FEMS Microbiology Letters 179, 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

29 TERIMA KASIH 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir