Assalamu’alaikum Wr. Wb.

Presentasi berjudul: "Assalamu’alaikum Wr. Wb."— Transcript presentasi:

1 Assalamu’alaikum Wr. Wb.

2 INSTUTUT TEKNOLOGI BANDUNG
APLIKASI T4 DNA LIGASE DALAM MENINGKATKAN ADENILASI DNA HENNY WIDHYASTUTI RISKI DWI MALIDA PROGRAM MAGISTER KIMIA INSTUTUT TEKNOLOGI BANDUNG

3 Bakteriofaga T4 suatu virus dsDNA berukuran 169 Kb yang mengkode hampir 300 gen dalam menghasilkan protein virus

4 Bakteriofaga T4 E. coli T4 DNA Ligase metabolisme virus, replikasi, rekombinasi dan perbaikan DNA, serta pada kloning molekuler

5 T4 DNA Ligase mengkatalisis pembentukan ikatan fosfodiester
di antara 5-PO4 dan 3-OH yang berdekatan dari dua fragmen dsDNA memerlukan suatu kation logam bivalen seperti Mg2+, dan menggabungkan DNA menggunakan ATP sebagai koenzim menggabungkan ujung tumpul (blunt end) maupun ujung lengket (sticky end)

6 Mekanisme Katalisis T4 DNA Ligase

7 Peningkatan adenilasi DNA
T4 DNA Ligase Aplikasi Peningkatan adenilasi DNA

8 DNA 5-adenilasi (5-AppDNA)
bentuk aktif intermediate dari reaksi yang dikatalisis oleh enzim yang dimodifikasi asam nukleat seperti DNA ligase

9 DNA 5-adenilasi (5-AppDNA)
Penelitian yang dilakukan oleh Chiuman dan Li pada tahun 2002 menjelaskan tentang prosedur 5-adenilasi oligonukleotida DNA menggunakan DNA ligase. Akan tetapi, aplikasi metode DNA adenilasi ini belum dapat digunakan untuk berbagai substrat oligonukleotida DNA Peningkatan prosedur DNA adenilasi dilakukan dengan menggunakan T4 DNA ligase serta strand akseptor dengan pemilihan ketidaksesuaian template akseptor C-T yang secara langsung berdekatan dengan sisi adenilasi (Patel et al., 2007)

10

11 Modifikasi T4 DNA Ligase
Isolasi enzim dari sumber (bakteri gram negatif, seperti E. coli) pada lingkungan yang berbeda. Perbedaan lingkungan dapat menyebabkan perbedaan aktivitas yang dihasilkan oleh suatu bakteri. Enrichment terhadap media pertumbuhan bakteri, sehingga ekspresi metabolit (misalnya enzim) yang dihasilkan memiliki aktivitas yang berbeda. Enzim yang dihasilkan kemudian diisolasi dan selanjutnya dilakukan karakterisasi untuk mengetahui aktivitas enzim tersebut.

12 Terima Kasih