Sensitivitas & Selektivitas

Presentasi berjudul: "Sensitivitas & Selektivitas"— Transcript presentasi:

1 Sensitivitas & Selektivitas
PENANGANAN SAMPEL Sampel Pengotor Analit Eksogen Endogen Sensitivitas & Selektivitas Endogen : protein, garam, lemak Eksogen : phthalates dalam plastik, hidrokarbon dalam rubber stopper

2 Pemurnian sampel Pemurnian awal / penanganan awal Ekstraksi
Kromatografi

3 Pemurnian awal PRE-TREATMENT Presipitasi / denaturasi protein
Ekstraksi solfen Liofilisasi Hidrolisis konjugat Homogenisasi Derivatisasi kimia sebagai pendahuluan ekstraksi

4 Presipitasi / denaturasi protein .... (1)
Protein  pengotor endogen : Mengikat obat  hasil analisis tidak valid Merusak alat (kolom HPLC) Presipitasi / denaturasi protein Perusakan ikatan antara protein dg obat / metabolitnya

5 Presipitasi / denaturasi protein .... (1)
Penambahan zat kimia Sentrifugasi Pemanasan Ultrafiltrasi

6 Presipitasi / denaturasi protein .... (1)
Sampel Metanol Asetonitril Sentrifuge Endapan Supernatan Pemanasan

7 Ekstraksi pelarut untuk menghilangkan seny hidrokarbon
Atur pH Obat terionisasi Ekstraksi dg pelarut organik Fase organik / hidrofobik : hidrokarbon Fase hidrofilik :

8 Liofilisasi ... (1) Alasan pemilihan liofilisasi :
Air sangat banyak, analit sangat larut air shg tidak dapat dipisahkan secara ekstraksi pelarut Analit mudah menguap & rusak oleh pemanasan Contoh : Feses  mengandung mikroflora yang merusak analit pada suhu kamar Feses  liofilisasi  serbuk  larutkan dengan pelarut yg sesuai  ekstraksi

9 Liofilisasi ... (2) Sampel dibekukan Lyophilizer Uap air divacum
Sublimasi Padatan kering Larutkan dg pelarut yg sesuai

10 Hidrolisis konjugat Hidrolisis dengan penambahan enzim
Metabolit terkonjugasi sangat hidrofil tidak dapat dipisahkan dengan ekstraksi pelarut Hidrolisis dengan penambahan enzim

11 Homogenisasi Sampel yang mengandung protein tidak larut
Sampel otot (homogenisasi : + HCl 1N) Sampel gelatinus Sputum (homogenisasi : sonifikasi) Sampel padat Feses (homogenisasi : + metanol)

12 Derivatisasi kimia Obat / metabolit  ekstraksi  rusak
Derivat obat / metabolit  ekstraksi  tidak rusak Hidralazin  ekstraksi pelarut organik (pH basa)  rusak Hidralazin + NaNO3 (pada pH asam)  tetrazolo (1,5a) phthalazin  ekstraksi pelarut organik (pH basa)  tidak rusak

13 Ekstraksi Pemisahan senyawa berdasarkan perbedaan kelarutan
Ekstraksi padat – cair Pemisahan senyawa menggunakan kolom kromatografi. Pemisahan didasarkan perbedaan kelarutan dalam fase gerak (pelarut) Parameter : konstanta distribusi (KD) Ekstraksi cair – cair

14 Konstanta Distribusi (KD)
KD = [Vlarutan x Wsolut dalam fase diam] [Wfase diam x Wsolut dalam larutan] Nilai KD dipengaruhi oleh : Polaritas pelarut Kecepatan aliran larutan Kontak larutan dengan fase diam

15 Ekstraksi cair – cair ... (1)
Pemisahan didasarkan perbedaan kelarutan senyawa pada pelarut organik & air. Parameter : koefisien partisi (P) P = Corganik / Cair Faktor yang mempengaruhi P Pelarut yang digunakan pH Derajat ionisasi

16 Ekstraksi cair – cair ... (2)
Darah utuh Sentrifuge serum analit protein CHCl3 uapkan

17 Solid Phase Extraction (SPE)
Teknik SPE digunakan untuk pra-perlakuan sampel atau clean-up sampel-sampel yang kotor seperti sampel dengan kandungan matriks yang tinggi seperti garam-garam, protein, polimer, resin dll. Efisiensi SPE dapat memperoleh recovery yang tinggi (>99 %).

18 Retensi (tertahannya) sampel
Tahapan SPE Pengkondisian Retensi (tertahannya) sampel Pembilasan Elusi

19 KLT Fase diam : padat Fase gerak : cair Pemisahan senyawa
Analisis kualitatif & kuantitatif (kurang sensitiv)

20 GC Fase diam : padat / cair Fase gerak : gas inert
Analisis kualitatif & kuantitatif Untuk pemeriksaan zat yang volatil & tahan panas

21 HPLC Fase diam : padat Fase gerak : cair
Analisis kualitatif & kuantitatif Untuk pemeriksaan zat yang tidak tahan panas & tidak volatil

22 Gel Permeation Chromatography (GPC)
Pemisahan berdasar perbedaan ukuran partikel Fase diam : gel Gel berupa butiran – butiran berpori (dekstran, poliakrilamid, polistiren) Fase gerak : cair Contoh : pemisahan makromolekul (lemak, protein, garam) dari sampel

23

24 TUGAS KELOMPOK PEKAN DEPAN
Buatlah presentsi kelompok ±5 orang) dengan durasi 15 menit mengenai prosedur ekstraksi untuk obat dan atau metabolitnya dalam sampel biologis beserta contoh penerapannya. Sub tema pilihan : Metode ekstraksi padat-cair Metode ekstraksi cair-cair Metode kromatografi Metode radiokimia Metode spektroskopi

25 HATUR NUHUN PISAN .... Jangan lupa untuk mencari tambahan informasi dari berbagai sumber lainnya...