Isolasi Papain dan Karakterisasi Biokimia Michelle 10509016 Surya 10509002 Gaby Almira 10509028

Enzim Papain Enzim papain merupakan enzim proteolitik yang dihasilkan dari isolasi penyadapan getah buah pepaya (Carica papaya, L.) Kegunaan dari papain: Dalam industri makanan dan minuman : pelunak daging stabilizer dalam pembuatan jelly pengental dalam pembuatan sirup sari buah penggumpal susu dalam pembuatan keju Dalam bidang farmasi: pelancar pencernaan luka infeksi mengurangi penggumpalan darah sebelum operasi

Tujuan Menentukan nilai Vmaks dan Km dari enzim papain Menentukan aktivitas enzim papain

Pepaya Getah pepaya mengandung tiga jenis enzim, yaitu enzim papain, kimopapain dan lisozim. Keistimewaan enzim papain Mempunyai kestabilan yang baik pada larutan yang mempunyai pH 5.0 Memiliki keaktifan daya tahan panas yang lebih tinggi dari enzim lain Tidak bersifat toksik Tak ada reaksi samping Dapat bekerja dengan baik pada konsentrasi rendah

Alat dan Bahan Alat : Bahan : Gelas kimia - Buah pepaya muda Tabung reaksi - Akuades Inkubator 500C - Aseton Batang pengaduk/vortex - Bufer fosfat 0,1pH 7,0 Spektrofotometer - Kasein 2% Stopwatch - L-sistein 0,1 M Freezdryer - Asam trikloro asetat - Standar Tirosin 1 mg/mL

Pengujian aktivitas enzim papain (Metode Murachi) Inkubasi t = 20 menit Kasein L-sistein bufer fosfat Inkubasi 5 menit (500C) + papain Inkubasi 20 menit (500C) + TCA 20% Sentrifugasi 10 menit Fitrat Ukur absorbansi (280 nm)

Metode murachi Inkubasi t = 0 menit L-sistein bufer fosfat papain + TCA 20 % Inkubasi 20 menit (500C) + kasein Sentrifugasi 10 menit Fitrat Ukur absorbansi (280 nm)

Data Pengamatan Absorbansi Larutan Standar Tirosin Absorbansi Larutan Sampel [Tirosin] (µg/mL) Absorbansi 40 0,235 80 0,496 120 0,609 160 0,815 Tabung (t = 0) Absorbansi Tabung (t = 20) Absorbasi 1 0,323 2 0,493 3 1,277 4 1,672 5 1,669

[Tirosin]kontrol (µg/mL) [Tirosin]sampel (µg/mL) Pengolahan Data Kurva Standar tirosin dari persamaan garis y = 0,0046 x + 0,0755 substitusi absorbansi maka diperoleh Tabung (t = 0) [Tirosin]kontrol (µg/mL) Tabung (t = 20) [Tirosin]sampel (µg/mL) 1 53,80435 2 90,76087 3 261,1957 4 347,0652 5 346,413

Pengolahan Data ( Penentuan Aktivitas Papain) Tabung A [ Tirosin] ppm I 0,323 53,80434783 II 0,493 90,76086957 III 1,277 261,1956522 IV 1,861 388,1521739 V 1,672 347,0652174 Unit aktivitas protease = 𝜇𝑔 𝑡𝑖𝑟𝑜𝑠𝑖𝑛 𝑚𝐿 𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚 20 𝑚𝑒𝑛𝑖𝑡 m Tirosin = 53,80434783 𝜇𝑔 𝑚𝐿 .3 𝑚𝐿 (𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑐𝑎𝑚𝑝𝑢𝑟𝑎𝑛)= 161,4130435 𝜇𝑔 Unit aktivitas protease= 161,4130435𝜇𝑔 0,5 𝑚𝐿 20 𝑚𝑒𝑛𝑖𝑡 =16,14130435 𝜇𝑔/𝑚𝐿/𝑚𝑒𝑛𝑖𝑡

Aktivitas papain Tabung [ Tirosin] ppm I 53,80434783 161,4130435 16,14130435 II 90,76086957 272,2826087 27,22826087 III 261,1956522 783,5869566 78,35869566 IV 388,1521739 1164,456522 116,4456522 V 347,0652174 1041,195652 104,1195652

[Tirosin]kontrol (µg/mL) [Tirosin]sampel (µg/mL) Penentuan Vmaks dan Km [Tirosin] = [Tirosin]sampel - [Tirosin]kontrol 𝑽 𝟎 = [𝑻𝒊𝒓𝒐𝒔𝒊𝒏]µ𝒈/𝒎𝑳 𝟐𝟎 𝒎𝒆𝒏𝒊𝒕 Tabung [Tirosin]kontrol (µg/mL) [Tirosin]sampel (µg/mL) [Tirosin] V0 (µg/mL/menit) 1 53,80435 2,690217 2 90,76087 4,538043 3 261,1957 13,05978 4 347,0652 17,35326 5 346,413 17,32065

Penentuan Nilai KM dan Vmax Berdasarkan Kurva Lineweaver-Burk [ kasein ] = 𝟐× 𝟏𝟎 𝟔 µ𝒈× 𝑽 𝒌𝒂𝒔𝒆𝒊𝒏 (𝒎𝑳) 𝟏𝟎𝟎𝒎𝑳 × 𝑽 𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 (𝒎𝑳) [Kasein] (µg/mL) V0 1/[kasein] 1/V0 570,6 2,690217 0,001753 0,371717 1139,6 4,538043 0,000878 0,220359 2841 13,05978 0,000352 0,076571 5638 17,35326 0,000177 0,057626 11100 17,32065 9,01E-05 0,057735

Nilai Vmaks dan Km 1 𝑉 = 𝐾 𝑀 𝑉 𝑚𝑎𝑥 1 [𝑆] + 1 𝑉 𝑚𝑎𝑥 Dari kurva diperoleh persamaan garis y = 199,42x + 0,0277. Berdasarkan persamaan Lineweaver-Burk; 1 𝑉 = 𝐾 𝑀 𝑉 𝑚𝑎𝑥 1 [𝑆] + 1 𝑉 𝑚𝑎𝑥 Maka dapat ditentukan V max dan KM sebagai berikut: 1 𝑉 𝑚𝑎𝑥 =0,0277 𝑽 𝒎𝒂𝒙 = 𝟏 𝟎,𝟎𝟐𝟕𝟕 =𝟑𝟔,𝟏𝟎𝟏𝟎𝟖𝟑 𝐾 𝑀 𝑉 𝑚𝑎𝑥 =199,42 𝑲 𝑴 =𝟏𝟗𝟗,𝟒𝟐 𝒙 𝟑𝟔,𝟏𝟎𝟏𝟎𝟖𝟑=𝟕𝟏𝟗𝟗,𝟐𝟕𝟕

Kurva michaelis menten

Pembahasan Fungsi reagen Kasein : substrat L-sistein : aktivator Buffer posfat : menjaga pH optimal TCA : menghentikan aktivitas enzim Inkubasi T= 0 -> blanko T= 20 -> sampel

Reaksi Hidrolisis

Thanks... ^^