Sensitivitas & Selektivitas PENANGANAN SAMPEL Sampel Pengotor Analit Eksogen Endogen Sensitivitas & Selektivitas Endogen : protein, garam, lemak Eksogen : phthalates dalam plastik, hidrokarbon dalam rubber stopper

Pemurnian sampel Pemurnian awal / penanganan awal Ekstraksi Kromatografi

Pemurnian awal PRE-TREATMENT Presipitasi / denaturasi protein Ekstraksi solfen Liofilisasi Hidrolisis konjugat Homogenisasi Derivatisasi kimia sebagai pendahuluan ekstraksi

Presipitasi / denaturasi protein .... (1) Protein  pengotor endogen : Mengikat obat  hasil analisis tidak valid Merusak alat (kolom HPLC) Presipitasi / denaturasi protein Perusakan ikatan antara protein dg obat / metabolitnya

Presipitasi / denaturasi protein .... (1) Penambahan zat kimia Sentrifugasi Pemanasan Ultrafiltrasi

Presipitasi / denaturasi protein .... (1) Sampel Metanol Asetonitril Sentrifuge Endapan Supernatan Pemanasan

Ekstraksi pelarut untuk menghilangkan seny hidrokarbon Atur pH Obat terionisasi Ekstraksi dg pelarut organik Fase organik / hidrofobik : hidrokarbon Fase hidrofilik :

Liofilisasi ... (1) Alasan pemilihan liofilisasi : Air sangat banyak, analit sangat larut air shg tidak dapat dipisahkan secara ekstraksi pelarut Analit mudah menguap & rusak oleh pemanasan Contoh : Feses  mengandung mikroflora yang merusak analit pada suhu kamar Feses  liofilisasi  serbuk  larutkan dengan pelarut yg sesuai  ekstraksi

Liofilisasi ... (2) Sampel dibekukan Lyophilizer Uap air divacum Sublimasi Padatan kering Larutkan dg pelarut yg sesuai

Hidrolisis konjugat Hidrolisis dengan penambahan enzim Metabolit terkonjugasi sangat hidrofil tidak dapat dipisahkan dengan ekstraksi pelarut Hidrolisis dengan penambahan enzim

Homogenisasi Sampel yang mengandung protein tidak larut Sampel otot (homogenisasi : + HCl 1N) Sampel gelatinus Sputum (homogenisasi : sonifikasi) Sampel padat Feses (homogenisasi : + metanol)

Derivatisasi kimia Obat / metabolit  ekstraksi  rusak Derivat obat / metabolit  ekstraksi  tidak rusak Hidralazin  ekstraksi pelarut organik (pH basa)  rusak Hidralazin + NaNO3 (pada pH asam)  tetrazolo (1,5a) phthalazin  ekstraksi pelarut organik (pH basa)  tidak rusak

Ekstraksi Pemisahan senyawa berdasarkan perbedaan kelarutan Ekstraksi padat – cair Pemisahan senyawa menggunakan kolom kromatografi. Pemisahan didasarkan perbedaan kelarutan dalam fase gerak (pelarut) Parameter : konstanta distribusi (KD) Ekstraksi cair – cair

Konstanta Distribusi (KD) KD = [Vlarutan x Wsolut dalam fase diam] [Wfase diam x Wsolut dalam larutan] Nilai KD dipengaruhi oleh : Polaritas pelarut Kecepatan aliran larutan Kontak larutan dengan fase diam

Ekstraksi cair – cair ... (1) Pemisahan didasarkan perbedaan kelarutan senyawa pada pelarut organik & air. Parameter : koefisien partisi (P) P = Corganik / Cair Faktor yang mempengaruhi P Pelarut yang digunakan pH Derajat ionisasi

Ekstraksi cair – cair ... (2) Darah utuh Sentrifuge serum analit protein CHCl3 uapkan

Solid Phase Extraction (SPE) Teknik SPE digunakan untuk pra-perlakuan sampel atau clean-up sampel-sampel yang kotor seperti sampel dengan kandungan matriks yang tinggi seperti garam-garam, protein, polimer, resin dll. Efisiensi SPE dapat memperoleh recovery yang tinggi (>99 %).

Retensi (tertahannya) sampel Tahapan SPE Pengkondisian Retensi (tertahannya) sampel Pembilasan Elusi

KLT Fase diam : padat Fase gerak : cair Pemisahan senyawa Analisis kualitatif & kuantitatif (kurang sensitiv)

GC Fase diam : padat / cair Fase gerak : gas inert Analisis kualitatif & kuantitatif Untuk pemeriksaan zat yang volatil & tahan panas

HPLC Fase diam : padat Fase gerak : cair Analisis kualitatif & kuantitatif Untuk pemeriksaan zat yang tidak tahan panas & tidak volatil

Gel Permeation Chromatography (GPC) Pemisahan berdasar perbedaan ukuran partikel Fase diam : gel Gel berupa butiran – butiran berpori (dekstran, poliakrilamid, polistiren) Fase gerak : cair Contoh : pemisahan makromolekul (lemak, protein, garam) dari sampel

TUGAS KELOMPOK PEKAN DEPAN Buatlah presentsi kelompok (@ ±5 orang) dengan durasi 15 menit mengenai prosedur ekstraksi untuk obat dan atau metabolitnya dalam sampel biologis beserta contoh penerapannya. Sub tema pilihan : Metode ekstraksi padat-cair Metode ekstraksi cair-cair Metode kromatografi Metode radiokimia Metode spektroskopi

HATUR NUHUN PISAN .... Jangan lupa untuk mencari tambahan informasi dari berbagai sumber lainnya...