DETEKSI FOOD INGREDIENT DAN CEMARAN PRODUK Andriani Dept. Biokimia dan Biologi Molekuler FK UNTAN

EKSTRAKSI DNA Definisi : proses mendapatkan DNA dari makanan atau bahan olahan makanan Proses : Menghancurkan dinding sel untuk bisa mendapatkan kandungan DNA dan RNA di dalamnya Menghilangkan membran lipid dengan menambahkan detergen atau surfaktan Menghilangkan protein dengan dengan proteinase – K Presipitasi dengan alkohol

EKSTRAKSI DNA dari sampel Tujuan : memperoleh DNA untuk digunakan sebagai template pada proses PCR Bahan dalam kit : Food lysis buffer Spin columns Buffer PB Buffer AW2 Buffer EB

PERALATAN Tissue lyzer Tabung 2 mL Vortex microsentrifuge Shaking thermoblock Microtube 1,5 mL Mikropipet Tips berbagai ukuran Sarung tangan free powder

Bahan Sampel Alkohol absolute Chloroform Kit isolasi DNAmakanan PROSEDUR KERJA : Proses disrupsi dan homogenisasi Proses ekstraksi dan purifikasi DNA : manual Prosedur kerja bisa dilihat di manual masing-masing

POLYMERASE CHAIN REACTION Merupakan proses perbanyakan (replikasi) DNA secara enzimatis untuk mendapatkan replikasi DNA dalam jumlah besar dan waktu singkat. Prinsip kerja PCR yaitu memperbanyak segmen spesifik DNA yang diawali dengan perlekatan dNTP-dNTP dalam reaksi termal mengikuti acuan primer

Bahan-bahan untuk PCR Template : DNA , sbg sumber DNA yang akan diperbanyak/diamplifikasi Primer : oligonukleotida, 18 – 30 basa, sbg acuan dalam proses inisiasi dan amplifikasi sekuen DNA DNA polimerase : enzim polimerase (Thermus aquaticus) , melakukan perlekatan dNTP menjadi untaian sekuen DNA pada tahap perpanjangan (annealing) dalam polimerisasi DNA dNTP : kumpula basa-basa penyusun DNA

Kation bivalen (MgCl2) , kofaktor Buffer PCR, menjaga keseimbangan PH saat proses amplifikasi Aquabidest (ddH2O), sebagai pelarut

TAHAPAN PCR Denaturasi (peleburan), untai ganda DNA menjadi untai tunggal, suhu tinggi 94-96oC Annealing (penempelan), penempelan primer pada DNA template yang komplemen pada urutan basanya. Spesifik pada suhu 45-60oC Extension (pemanjangan), proses DNA polimerase melengkapi utas tunggal DNA menjadi utas ganda, dengan memperpanjang fragment primer. Memerlukan dNTP.

Konten kit Kit assay Positive control DNA RNAse-free water PCR master mix : dNTP, polimerase STEP PENGERJAAN BISA DILIHAT DALAM MANUAL

Contoh Produk

TERIMA KASIH