PRESENTASI ENZIMOLOGI (KI-5162)

Presentasi berjudul: "PRESENTASI ENZIMOLOGI (KI-5162)"— Transcript presentasi:

1 PRESENTASI ENZIMOLOGI (KI-5162)
“Gliserol kinase “ e.c Beta Zahra Al Husna

2 AGENDA PRESENTASI PENDAHULUAN TATA NAMA ENZIM STRUKTUR ISOLASI
PEMURNIAN MEKANISME KINETIKA INHIBISI

3 PENDAHULUAN GLISEROL Gliserol : produk metabolisme jaringan adiposa (glukoneogenesis) Hanya dapat digunakan oleh jaringan yang memiliki enzim pengaktifnya yaitu : GLISEROL KINASE

4 TATA NAMA ENZIM E.C Nama sistematik : ATP: glycerol-3-phosphotransferase Nama trivial : Gliserol kinase Nama dari GK Sub sub kelas fosfotransferase Kelas transferase Sub kelas fosfotransferase

5 STRUKTUR Tempat berikatannya ADP & gliserol Struktur domain dan daerah tempat berikatannya efektor pada GK Sumber : Eschericia coli Protein oligomer yang tetramer (terdiri dari 4 subunit yang identik). Daerah aktifnya mengandung ADP dan gliserol pada satu unitnya. Berat molekul enzim : 217,000 Berat molekul subunit : 55,000 The ATPase core subdomains are shown in grey; subdomains IB, IIB, IC and IIC are shown in red and labeled accordingly. The extra b strands contributed to the ATPase core b sheets by subdomains IC and IIC are shown in yellow. The IIAGlc and orthophosphate (putative FBP) binding regions are labeled accordingly. ADP and glycerol (shown as balland- stick structures) are bound between the core b sheets of the ATPase domain.

6 TOPOLOGI STRUKTUR Ikatan Mg2+ Hidrolisis ATP Ikatan van der waals
Ikatan hidrogen

7 ISOLASI starter (kultur pH 7,0)
Dipindahkan ke medium 100 L dalam fermentor (37oC, 5 kubik feet/min, 8-12 jam) Kultur dipindah ke bak dingin yang berisi sel yang dipanen dengan Sharples sentrifuga Sel dicuci dengan buffer standar pH 7,0 (4oC) Berat bersih (745 g) pemurnian Karakteristik protein

8 PEMURNIAN Sel 745 gr (4oC) disuspensi dalam 2 ml buffer
Homogenat disentrifuga 20 min ( x g) Ultrasentrifuga ( x g, 1 jam) Suspensi diaduk semalam Presipitat dihilangkan dgn sentrifugasi ( x g, 30 min), supernatan difraksinasi dgn (NH4)2SO4 Fraksi (NH4)2SO4 didilusi dgn buffer 0,1 M KCl (36 jam) ke kolom DEAE-selulosa (500 ml) Protein dielusi dgn 1650 ml buffer 0,1 M KCl (mixing chamber) & 1650 ml buffer 0,25 M KCl (reservoir) Konsentrat (NH4)2SO4 didilusi dalam kolom Sephadex-200 dengan buffer Diawasi dgn ultraviolet analyzer 280 nm Elektroforesis 2-D (gradien pH)

9

10 Reaksi aktivitas gliserol dengan gliserol kinase
MEKANISME Reaksi aktivitas gliserol dengan gliserol kinase Transfer fosfat dari ATP

11 KINETIKA

12 INHIBISI PENGENDALIAN INHIBISI
GK terinhibisi secara alosterik oleh fruktosa bifosfat (FDP). Inhibisi dengan FDP  nonkompetitif PENGENDALIAN INHIBISI Inhibisi gliserol kinase oleh FDP dapat direduksi dengan: 1. memanipulasi kondisi ioniknya 2. dilakukan mutasi

13 1. Manipulasi kondisi ionik : menggunakan garam (misal: KCl) konsentrasi tinggi  menurunkan sensitivitas dan stimulasi terhadap FDP. Pengaruh garam lain terhadap reaksi gliserol kinase Pengaruh KCl terhadap reaksi gliserol kinase 2. Dilakukan mutasi

14 SEKIAN dan terima Kasih