GENE GUN Agustina Setiawati
PENDAHULUAN Metode transformasi dgn cara menembak sel target dengan microcarrier yg diselubungi DNA Nama lain: BIOLISTIC (Bioballistic) TRANSFORMATION It was designed by John Sanford at Cornell University in 1987
The Helios Gene gun BIORAD Particle Inflow Gun (PIG) PDS-1000/He The Helios Gene gun BIORAD
Aplikasi dalam terapi gen EX VIVO Sel target: kulit, liver dan otak
Syarat Microcarrier Mempunyai massa yg cukup utk menghasilkan energi yg cukup menembus sel Biasanya unsur logam (emas, tungsten, palladium, rhodium, platinum, iridium) Inert terhadap reaksi dgn DNA dan bagian sel Diameter 0.36- 0.6 μm supaya sistem dispersinya baik
STEP 1 Partikel emas/tungsten diselubungi dgn DNA target cara: Emas/tungsten dalam larutan PEG atau spermidin diinkubasi bersama larutan DNA dalam CaCl2
STEP 2 Micropartikel-DNA dialirkan dgn gas helium (He) melalui stop screen dlm kondisi vakum Pada stop screen, mikropartikel-DNA diuapkan dgn cara pemanasan sehingga terbentuk dispersi padat. Dgn kecepatan tinggi, mikropartikel DNA ditembakkan dalam sel target
Efisiensi Transformasi Dipengaruhi oleh faktor-faktor: Tipe sel Kondisi pertumbuhan sel: medium Gene gun yg digunakan Skill
Mekanisme transformasi
Kelebihan Dapat diaplikasikan ke dalam berbagai macam sel Proses dapat dimodifikasi
Kekurangan Mahal (peralatan & microcarrier) DNA masuk secara random ke dalam sel (sitoplasma, nukleus, RE dsb) DNA yg masuk dalam sel tidak terproteksi
TERIMA KASIH