Standard Analytical Protocol for SalmonellaTyphi in Drinking Water Environmental Protection Agency (EPA), US EPA 600/R-10/133 ǀ October 2010 ǀ

Kelompok 8 Rawinda M. Fazar I. Rosyid Ulin Nuha Anisatun Ni’mah Lailatul Wastiyah Ida Sulistyaningrum

Klasifikasi Salmonella Kingdom: Bacteria Phylum: Proteobacteria Class: Gamma Proteobacteria Ordo: Enterobacteria Famili: Enterobacteriaceae Genus: Salmonella Species: Salmonella Typhi (S. Typhi)

Patogenitas Salmonella Penyebab utama foodborne diseases (penyakit yang disebarkan melalui makanan), yaitu salmonellosis Ciri-ciri:diare, kram perut, demam 8-72 jam, sakit kepala, mual dan muntah- muntah Serotipe Salmonella menyebabkan penyakit organ pencernaan.

Typhoid fever

Morfologi Salmonella Gram negatif, patogen Bentuk batang Motil Dapat bergerak bebas dengan flagella Tidak memfermentasi laktosa

Ruang Lingkup & Aplikasi Identifikasi, konfirmasi, dan kuantitasi Salmonella enterica subspesies enterica serotype Typhi (S.Typhi) dalam sampel air minum

Alat Autoklaf 121ºC, 15 psi, 15 menit Neraca Gelas beker Biological Safety Cabinet, Kelas II Gelas borosilikat bertutup 250mL Erlenmeyer 500mL Sarung tangan Inkubator Ose Cawan petri pH meter Pipet Magnetic stirer + hotplate Termometer

Bahan PBS (Phosphate Buffered Saline) UP Broth (Universal Pre-enrichment) contoh: NB SCB (Selenite Cystine Broth) BSA (Bismuth Sulfite Agar) MMA (Miller- Mallinson Agar) TSA (Tryptic Soy Agar) SalmonellaVi antiserum

Tahapan Pra-pengkayaan - Kualitatif - Kuantitatif Pengkayaan selektif Isolasi ke media selektif Identifikasi & konfirmasi - Reaksi biokimia - uji serologi

Pra-pengkayaan Kualitatif 25 mL sampel air inokulasi ke 25 mL UP 2X Inkubasi pada 35 ± 0,5 º C, selama 24 ±2 jam Hasil + = timbul kekeruhan

Pra-Pengkayaan ml sampel air inokulasi ke 5 tabung ml sampel air inokulasi ke 5 tabung ml sampel air inokulasi ke 5 tabung UP Inkubasi 35 ±0,5º C, 24 ± 2 jam

Skema Pra-Pengayaan Kuantitatif

Lanjutan Pengkayaan selektif 1 mL pra-pengkayaan (+) dicampur dengan 10 mL SCB Inkubasi 35 ± 0,5ºC, selama 18 ±2 jam Hasil + = tumbuh Hasil (+) pra-pengkayaan (kualitatif & kuantitatif) Isolasi ke media selektif 1 ose hasil (+) SCB inokulasi ke cawan petri BSA dan MMA  inkubasi 35 ± 0,5ºC, selama 24 – 48 jam Hasil + = BSA hijau-hitam metalik; MMA hitam 1 ose hasil (+) BSA & MMA inokulasi ke TSA  inkubasi 35 ± 0,5ºC, selama 24 jam

Koloni S. Typhi di BSA

Tes Biokimia TSI (merah) LIA (ungu) sebelum TSI (+) LIA (+) sesudah 35 º C,24 ± 2 jam

Salmonella: Urease – ; Dulcitol + (kecuali S. Arizonae); Laktose – (kecuali S. Arizonae); Sukrosa –

Salmonella: Indol – (Kiri)

Salmonella: KCN – (kiri), Malonate + utk S.Arizonae (kanan)

Salmonella: VP – (Kiri) Salmonella : + MR (Kanan)

Salmonella : variabel Simmons Citrate

Penentuan MPN S.Typhi 20 mL10 mL1 mL 4/55/51/5 Contoh: Tabung Seri MPN dalam 100 mL Sampel tanpa pengenceran

Indeks MPN tabel 5= Pengenceran yang di tengah= 1 (sampel tanpa pengenceran)

Kesimpulan S.Typhi : tidak memfermentasi laktosa, gram negatif, berbentuk batang, memfermentasi D-glukosa tapi tidak menghasilkan gas, oksidase negatif, katalase positif, memproduksi H2S, urease negatif Nilai MPN untuk sampel air dalam 100 mL adalah 15,24. Syarat MA PPOM 74/MIK/06: Salmonella negatif koloni/100 mL air.

Terima Kasih