Lipase Termostabil dari Bakteri Termofilik Isolat Gedong Songo Anita Herawati Permana 105 06 033 Dr. Fida Madayanti Waganegara 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Agenda Presentasi PENDAHULUAN STRATEGI PENELITIAN HASIL KESIMPULAN 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

PENDAHULUAN Latar Belakang Rumusan Masalah Tujuan 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Latar Belakang (1 dari 3) Aplikatif di Industri 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Proses industri umumnya memerlukan suhu tinggi!!! Latar Belakang (2 dari 3) PERMASALAHAN: Proses industri umumnya memerlukan suhu tinggi!!! ENZIM KATALIS) (BIO RAMAH KUNGAN LING- REAKSI EFISIEN LEBIH TERARAH ENZIM TERMOSTABIL 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Mampu mempertahankan struktur 3D di suhu tinggi Latar Belakang (3 dari 3) Mampu mempertahankan struktur 3D di suhu tinggi ENZIM TERMOSTABIL RING OF FIRE!!! MIKROORGANISME TERMOFILIK YTae-13 (Aminin, 2008) 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Ruang Lingkup (1 dari 2) YTae-13 (Rizqi, 2009) YTae-1 YTae-13 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Ruang Lingkup (2 dari 2) (Rizqi, 2009) 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Tujuan mengisolasi enzim lipase yang diekspresikan oleh YTae-13, dan mengarakterisasinya 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

STRATEGI PENELITIAN 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Strategi Penelitian (1 dari 3) Isolat YTae-13 # Pembuatan Kurva Pertumbuhan # Pembuatan Kurva Produksi Enzim Kurva Pertumbuhan dan Kurva Produksi Enzim # Penumbuhan Starter # Produksi Enzim # Isolasi Enzim (Panen) Ekstrak Kasar Enzim (EKE) 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Strategi Penelitian (2 dari 3) Ekstrak Kasar Enzim (EKE) # Fraksinasi Ammonium Sulfat # Dialisis EKE, Enzim Fraksi 0-20% jenuh, Enzim Fraksi 20-40% jenuh, Enzim Fraksi 40-60% jenuh, Enzim Fraksi 60-80% jenuh, Enzim Fraksi 80-100% jenuh # Uji Aktivitas Spesifik Fraksi Aktif 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Strategi Penelitian (3 dari 3) Fraksi Aktif # Elektroforesis Native-PAGE # Perlakuan kejut panas Fraksi Lebih Murni # Zimografi # Karakterisasi Karakter Enzim 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Kondisi Sumber Air Panas Gedong Songo Mikroorganisme Mikroorganisme: Prokariot Eukariot Arkea Pshycophilic (1-5oC) Mesophilic (20-37oC) Kondisi Sumber Air Panas Gedong Songo Temperatur 82oC pH 6 Kondisi air jernih Hyperthermophilic (>> 120oC) Thermophilic (40 – 100oC) 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

YTae-13 Nama Komposisi GSA GSB YT MB TS G 0,15 % yeast dan 0,15 % tripton 0,5 % pepton; 0,25 % yeast; 0,5 % NaCl 0,02 % yeast dan 0,02 % tripton 0,02 % beef extract; 0,02 % pepton; dan 0,01 % NaCl 5 gram/100mL kaldu tauge dan 0,02 % sukrosa 0,1 % glukosa No Strain Kedekatan Relatif 1 2 3 4 5 6 7 8 9 dYTae-1 dYTae-3 dYTae-5 dYTae-13 dYTae-14 dGae-3 dNBae-1 dNBae-1X dNBae-3X Geobacillus sp.E263 Geobacillus thermoleovorans Geobacillus lituanicus BGSCW9A9 Geobacillus vulgivagus CDZ1 Geobacillus thermoleovorans Tl Thermus sp.RH-0401 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Fraksinasi dan Dialisis 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Aktivitas Spesifik Aktivitas enzim per kadar protein Penentuan Enzim + Bradford (1 : 3) Penentuan Kadar Protein 595 nm + LIPASE, 15’, 65oC, pH 8 405 nm 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Native-PAGE dan Zimografi Elektroforesis Gel Poliakrilamid Ukuran besar, muatan positif tinggi muatan positif rendah Ukuran kecil, 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

HASIL 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

YTae-13 70oC 55oC 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Kurva Pertumbuhan dan Kurva Produksi Enzim (Suhu 70oC) 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Kurva Pertumbuhan dan Kurva Produksi (Suhu 55oC) 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Inokulasi ke media produksi, Ekstrak Kasar Enzim (EKE) Isolasi Enzim Inkubasi 55oC, pH 6,5, 150 rpm (starter) YTae-13 OD 0,5-0,8 (sekitar 13 jam) Inokulasi ke media produksi, Inokulum 10% V/V, Inkubasi 17 jam Sentrifugasi Supernatan: Ekstrak Kasar Enzim (EKE) 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Aktivitas Spesifik Lipase Hasil Fraksinasi 0,753 0,277 0,206 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Native-PAGE M 40 - 60 20- 20 80 100 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

Aktivitas Spesifik setelah Perlakuan Kejut-Panas 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

YTae-13 dapat mengekspersikan lipase lebih dari satu kali selama fasa hidupnya. Setelah dilakukan fraksinasi dan dialisis terhadap enzim lipase puncak ketiga, aktivitas spesifik tertinggi ditunjukkan oleh fraksi ammonium sulfat 0-20% jenuh. Perlakuan kejut-panas membuat kemurnian enzim meningkat dengan tersingkirkannya enzim-enzim non-termostabil. KESIMPULAN 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

REFERENSI Lee, Dong-Woo, et. al.. 1999. Isolation and Characterization of a Thermophilic Lipase from Bacillus thermoleovorans ID-1. FEMS Microbiology Letters 179, 393-400. 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir

TERIMA KASIH 26/05/2010 Seminar Tugas Akhir