PRESENTASI ENZIMOLOGI (KI-5162) “Gliserol kinase “ e.c 2.7.1.30 Beta Zahra Al Husna 10507009

AGENDA PRESENTASI PENDAHULUAN TATA NAMA ENZIM STRUKTUR ISOLASI PEMURNIAN MEKANISME KINETIKA INHIBISI

PENDAHULUAN GLISEROL Gliserol : produk metabolisme jaringan adiposa (glukoneogenesis) Hanya dapat digunakan oleh jaringan yang memiliki enzim pengaktifnya yaitu : GLISEROL KINASE

TATA NAMA ENZIM E.C 2.7.1.30 Nama sistematik : ATP: glycerol-3-phosphotransferase Nama trivial : Gliserol kinase Nama dari GK Sub sub kelas fosfotransferase Kelas transferase Sub kelas fosfotransferase

STRUKTUR Tempat berikatannya ADP & gliserol Struktur domain dan daerah tempat berikatannya efektor pada GK Sumber : Eschericia coli Protein oligomer yang tetramer (terdiri dari 4 subunit yang identik). Daerah aktifnya mengandung ADP dan gliserol pada satu unitnya. Berat molekul enzim : 217,000 Berat molekul subunit : 55,000 The ATPase core subdomains are shown in grey; subdomains IB, IIB, IC and IIC are shown in red and labeled accordingly. The extra b strands contributed to the ATPase core b sheets by subdomains IC and IIC are shown in yellow. The IIAGlc and orthophosphate (putative FBP) binding regions are labeled accordingly. ADP and glycerol (shown as balland- stick structures) are bound between the core b sheets of the ATPase domain.

TOPOLOGI STRUKTUR Ikatan Mg2+ Hidrolisis ATP Ikatan van der waals Ikatan hidrogen

ISOLASI starter (kultur pH 7,0) Dipindahkan ke medium 100 L dalam fermentor (37oC, 5 kubik feet/min, 8-12 jam) Kultur dipindah ke bak dingin yang berisi sel yang dipanen dengan Sharples sentrifuga Sel dicuci dengan buffer standar pH 7,0 (4oC) Berat bersih (745 g) pemurnian Karakteristik protein

PEMURNIAN Sel 745 gr (4oC) disuspensi dalam 2 ml buffer Homogenat disentrifuga 20 min (48.000 x g) Ultrasentrifuga (100.000 x g, 1 jam) Suspensi diaduk semalam Presipitat dihilangkan dgn sentrifugasi (30.000 x g, 30 min), supernatan difraksinasi dgn (NH4)2SO4 Fraksi (NH4)2SO4 didilusi dgn buffer 0,1 M KCl (36 jam) ke kolom DEAE-selulosa (500 ml) Protein dielusi dgn 1650 ml buffer 0,1 M KCl (mixing chamber) & 1650 ml buffer 0,25 M KCl (reservoir) Konsentrat (NH4)2SO4 didilusi dalam kolom Sephadex-200 dengan buffer Diawasi dgn ultraviolet analyzer 280 nm Elektroforesis 2-D (gradien pH)

Reaksi aktivitas gliserol dengan gliserol kinase MEKANISME Reaksi aktivitas gliserol dengan gliserol kinase Transfer fosfat dari ATP

KINETIKA

INHIBISI PENGENDALIAN INHIBISI GK terinhibisi secara alosterik oleh fruktosa bifosfat (FDP). Inhibisi dengan FDP  nonkompetitif PENGENDALIAN INHIBISI Inhibisi gliserol kinase oleh FDP dapat direduksi dengan: 1. memanipulasi kondisi ioniknya 2. dilakukan mutasi

1. Manipulasi kondisi ionik : menggunakan garam (misal: KCl) konsentrasi tinggi  menurunkan sensitivitas dan stimulasi terhadap FDP. Pengaruh garam lain terhadap reaksi gliserol kinase Pengaruh KCl terhadap reaksi gliserol kinase 2. Dilakukan mutasi

SEKIAN dan terima Kasih