PEMERIKSAAN ANGKA KUMAN Zainab, M.Si., Apt

TUJUAN Mahasiswa dapat menentukan jumlah bakteri pada sampel yang diteliti menggunakan metode angka lempeng total.

ALAT DAN BAHAN Alat : Bahan: lampu spiritus Autoclave Inkubator Mikropipet Spreader Bahan: Sampel = air sumur, es batu, minuman dan makanan dll. NaCl fisiologis steril sebagai pengencer Media Mueller Hinton untuk menghitung angka lempeng total Media TBX untuk identifikasi Escherichia coli

METODE PEMERIKSAAN ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT) Pengenceran Sampel (sample berupa cairan) Sampel diencerkan dg larutan NaCl fisiologis. Pengenceran dilakukan 10 kali, 100 kali, 1000 kali dan 10.000 kali. Adapun cara pengencerannya adalah sebagai berikut : 10 kali : Sampel dipipet secara aseptic sebanyak 0,5 ml ke dalam tabung reaksi yang telah berisi 4,5 ml larutan NaCl fisiologis, kemudian dihomogenkan. 100 kali : Diambil 0,5 ml dari pengenceran 10 kali, ditambahkan 4,5 ml larutan NaCl fisiologis dan dihomogenkan. 1000 kali : Diambil 0,5 ml dari pengenceran 100 kali, ditambahkan 4,5 ml larutan NaCl fisiologis dan dihomogenkan. 10.000 kali: Diambil 0,5 ml dari pengenceran 1000 kali, ditambahkan 4,5 ml larutan NaCl fisiologis dan dihomogenkan Sample yang berupa sediaan padat : ditimbang seksama sebanyak 0,5 g. Dimasukkan secara aseptic ke dalam tabung dan ditambah 4,5 ml larutan NaCl fisiologis steril (pengenceran 10 kali) campur homogen, pengenceran selanjutnya sama dengan di atas.

METODE PEMERIKSAAN ANGKA KUMAN 1. Dilakukan pengenceran 1 : 10, 1 : 100, 1 : 1000, 1 : 10000 dengan NaCl 0,9 % steril. 2. Diambil 100 µl tuangkan pada media MH untuk masing-masing pengenceran. Kemudian ratakan dengan spreader berulang-ulang hingga cairan merata pada petri (Metode cawan sebar/spread plate). 3. Diinkubasi pada suhu 37 C selama 18-24 jam. 4. Dihitung jumlah koloni bakteri pada masing-masing petri pada berbagai pengenceran.

Uji angka lempeng total (ALT)

HASIL PEMERIKSAAN ANGKA KUMAN

CARA PENGHITUNGAN Hitung koloni pada masing-masing pengenceran. Koloni yang menumpuk tidak dapat dihitung. Cari petri dg koloni yang tidak menumpuk dan dapat dihitung. Jumlah koloni yg representatif adalah yang berjumlah antara 30-300 koloni. Jumlah koloni dihitung dg rumus.

RUMUS ALT = Satuan ALT = CFU/ml atau CFU/g Faktor pengenceran Jumlah koloni yg dimasukkan rumus adalah jml koloni yang representatif

Identifikasi E. coli dg media TBX 100 µL sampel pada pengenceran tertentu (ALT) inokulasi pada media TBX, ratakan Inkubasi 18-24 jam dengan suhu 37 0C Amati koloni yang tumbuh Warna biru-kehijauan (Positif E.coli)

REAKSI YG TERJADI

Koloni E. coli di media TBX