ISOLASI ENZIM ENZIM DAPAT DIISOLASI DARI MAKHLUK HIDUP ISOLASI ENZIM PADA UMUMNYA DARI MIKROORAGNISME, TUMBUHAN DAN HEWAN PENGHASIL UTAMA DARI MIKROORGANISME ADALAH BAKTERI, JAMUR, AKTINOMICETES, YEAST DAN ARCHEAE

ISOLASI ENZIM ENZIM EKSTRASELULER ADALAH ENZIM YANG DISEKRESIKAN OLEH SEL KE LINGKUNGANNYA CONTOHNYA ADALAH ENZIM PROTEASE EKSTRASELULER YANG DIHASILKAN OLEH BAKTERI BACILLUS, DIMANA ENZIM DISEKRESIKAN KE MEDIA PERTUMBUHANNYA ENZIM INTRASELULER ADALAH ENZIM YANG HANYA BERADA DALAM SEL, TIDAK DAPAT DISEKRESIKAN KE LINGKUNGANNYA CONTOHNYA ADALAH ENZIM PROTEASE INTRASELULER YANG DIHASILKAN OLEH BACILLUS SUBTILIS, YANG BERFUNGSI SEBAGAI “AUTOLYSIS” PADA SEL YANG TELAH MATI.

ISOLASI ENZIM EKSTRASELULER DILAKUKAN DETERMINASI LEBIH DAHULU SEPERTI “SCREENING” ENZIM PADA MIKROORGANISME YANG DIDUGA PENGHASIL ENZIM. METODE YANG DIGUNAKAN ADALAH DENGAN MENUMBUHKAN MIKROBA PADA MEDIUM PADAT MIKROBA PENGHASIL ENZIM, DIKETAHUI DENGAN ADANYA INDIKASI SEPERTI TERBENTUKNYA DAERAH JERNIH DISEKITAR KOLONI MIKROBA

PENAPISAN Bacillus spp. PENGHASIL PROTEASE DAN KERATINASE Zona bening pada penapisan Bacillus sp. penghasil protease pada media Skim Agar Zona bening pada penapisan Bacillus sp. penghasil keratinase pada media basal + keratin

“Clear Zone”

ISOLASI ENZIM EKTRASELULER PRODUKSI ENZIM DARI SEL BAKTERI SENTRIFUGASI MEDIA PRODUKSI ENZIM PADA 6000 xg, SELAMA 15-20 MENIT PADA SUHU 4 C SUPERNATAN MERUPAKAN LARUTAN KASAR ENZIM (“CRUDE ENZIM) DILAKUKAN UJI AKTIVITAS ENZIM

PRODUKSI DAN ISOLASI ENZIM EKSTRASELULER Sentrifuga 6000 xg, 4 C 15 menit BIAKAN BAKTERI PRODUKSI ENZIM UJI AKTIVITAS ENZIM

UJI AKTIVITAS KERATINASE TERMOSTABIL MODIFIKASI METODE BRANDELLI DAN RIFFEL 400 Keratin, 100 mg/ml Bufer Fosfat 0,1 M pH 7.5 100 ul Enzim 1,25 ml TCA 10%, 20 menit Sentrifuga, 6000 xg 20 menit Supernatan 0,375 ml Absorbansi 578 nm + 0,25 ml 1 N Folin- Ciocalteu + 1,25 ml Na2CO3 Inkubasi 37 C, 20 menit

ISOLASI ENZIM INTRASELULER PRODUKSI ENZIM DARI SEL BAKTERI SENTRIFUGASI MEDIA PRODUKSI ENZIM PADA 6000 xg, SELAMA 15-20 MENIT PADA SUHU 4 C BUANG SUPERNATAN, MASSA SEL DICUCI DENGAN BUFER NaCl 0,85%, TIGA KALI, LARUTKAN SEL DENGAN SEDIKIT BUFER DILAKUKAN PEMECAHAN SEL, SECARA : FISIS ATAUPUN KIMIAWI DISENTRIFUGA LARUTAN DAN DIAMBIL SUPERNATAN (CRUDE ENZIM) DILAKUKAN UJI AKTIVITAS ENZIM

PRODUKSI DAN ISOLASI ENZIM INTRASELULER Supernatan dibuang Sentrifuga SEL DICUCI 3 KALI 6000 xg, 4 C 15 menit BIAKAN BAKTERI PRODUKSI ENZIM SEL PECAH SEL SECARA FISIS ATAU KIMIAWI UJI AKTIVITAS ENZIM Sentrifuga 6000 xg, 4 C 15 menit