Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

Sampel PengotorAnalit Eksogen Endogen Sensitivitas & Selektivitas PENANGANAN SAMPEL.

Presentasi serupa


Presentasi berjudul: "Sampel PengotorAnalit Eksogen Endogen Sensitivitas & Selektivitas PENANGANAN SAMPEL."— Transcript presentasi:

1 Sampel PengotorAnalit Eksogen Endogen Sensitivitas & Selektivitas PENANGANAN SAMPEL

2 Pemurnian sampel Pemurnian awal / penanganan awal EkstraksiKromatografi

3 Pemurnian awal PRE- TREATMENT Presipitasi / denaturasi protein Ekstraksi solfen Liofilisasi Hidrolisis konjugat Homogenisasi Derivatisasi kimia sebagai pendahuluan ekstraksi

4 Presipitasi / denaturasi protein.... (1) Protein  pengotor endogen : Protein  pengotor endogen : Mengikat obat  hasil analisis tidak valid Mengikat obat  hasil analisis tidak valid Merusak alat (kolom HPLC) Merusak alat (kolom HPLC) Presipitasi / denaturasi protein Presipitasi / denaturasi protein Perusakan ikatan antara protein dg obat / metabolitnya

5 Presipitasi / denaturasi protein.... (1) Penambahan zat kimiaSentrifugasiPemanasanUltrafiltrasi

6 Presipitasi / denaturasi protein.... (1) SampelMetanolAsetonitril Sentrifuge EndapanSupernatan Pemanasan Sentrifuge EndapanSupernatan

7 Ekstraksi pelarut untuk menghilangkan seny hidrokarbon Atur pH Obat terionisasi Ekstraksi dg pelarut organik Fase organik / hidrofobik : hidrokarbon Fase hidrofilik : Obat terionisasi

8 Liofilisasi... (1) Alasan pemilihan liofilisasi : Air sangat banyak, analit sangat larut air shg tidak dapat dipisahkan secara ekstraksi pelarut Analit mudah menguap & rusak oleh pemanasan Contoh : Feses  mengandung mikroflora yang merusak analit pada suhu kamar Feses  liofilisasi  serbuk  larutkan dengan pelarut yg sesuai  ekstraksi Feses  liofilisasi  serbuk  larutkan dengan pelarut yg sesuai  ekstraksi

9 Liofilisasi... (2) Sampel dibekukan Lyophilizer Uap air divacum Sublimasi Padatan kering Larutkan dg pelarut yg sesuai

10 Hidrolisis konjugat Hidrolisis dengan penambahan enzim Hidrolisis dengan penambahan enzim tidak dapat dipisahkan dengan ekstraksi pelarut sangat hidrofil Metabolit terkonjugasi

11 Homogenisasi Sampel padat Feses (homogenisasi : + metanol) Sampel gelatinus Sputum (homogenisasi : sonifikasi) Sampel yang mengandung protein tidak larut Sampel otot (homogenisasi : + HCl 1N)

12 Derivatisasi kimia Obat / metabolit  ekstraksi  rusak Obat / metabolit  ekstraksi  rusak Derivat obat / metabolit  ekstraksi  tidak rusak Derivat obat / metabolit  ekstraksi  tidak rusak Hidralazin  ekstraksi pelarut organik (pH basa)  rusak Hidralazin  ekstraksi pelarut organik (pH basa)  rusak Hidralazin + NaNO3 (pada pH asam)  tetrazolo (1,5a) phthalazin  ekstraksi pelarut organik (pH basa)  tidak rusak Hidralazin + NaNO3 (pada pH asam)  tetrazolo (1,5a) phthalazin  ekstraksi pelarut organik (pH basa)  tidak rusak

13 Ekstraksi Pemisahan senyawa berdasarkan perbedaan kelarutan Pemisahan senyawa berdasarkan perbedaan kelarutan Ekstraksi padat – cair Ekstraksi padat – cair Pemisahan senyawa menggunakan kolom kromatografi. Pemisahan senyawa menggunakan kolom kromatografi. Pemisahan didasarkan perbedaan kelarutan dalam fase gerak (pelarut) Pemisahan didasarkan perbedaan kelarutan dalam fase gerak (pelarut) Parameter : konstanta distribusi (KD) Parameter : konstanta distribusi (KD) Ekstraksi cair – cair Ekstraksi cair – cair

14 K D = [V larutan x W solut dalam fase diam ] [W fase diam x W solut dalam larutan ] Nilai K D dipengaruhi oleh : Polaritas pelarut Kecepatan aliran larutan Kontak larutan dengan fase diam Konstanta Distribusi (KD)

15 Ekstraksi cair – cair... (1) Pemisahan didasarkan perbedaan kelarutan senyawa pada pelarut organik & air. Pemisahan didasarkan perbedaan kelarutan senyawa pada pelarut organik & air. Parameter : koefisien partisi (P) Parameter : koefisien partisi (P) P = C organik / C air P = C organik / C air Faktor yang mempengaruhi P Faktor yang mempengaruhi P Pelarut yang digunakan Pelarut yang digunakan pH pH Derajat ionisasi Derajat ionisasi

16 Darah utuh Sentrifuge serum analit proteinCHCl 3 proteinCHCl 3 uapkan analit Ekstraksi cair – cair... (2)

17 Solid Phase Extraction (SPE) Teknik SPE digunakan untuk pra-perlakuan sampel atau clean-up sampel-sampel yang kotor seperti sampel dengan kandungan matriks yang tinggi seperti garam-garam, protein, polimer, resin dll. Efisiensi SPE dapat memperoleh recovery yang tinggi (>99 %).

18 Tahapan SPE Elusi Pembilasan Retensi (tertahannya) sampel Pengkondisian

19 KLT Fase diam : padat Fase gerak : cair Pemisahan senyawa Analisis kualitatif & kuantitatif (kurang sensitiv)

20 GC Fase diam : padat / cair Fase gerak : gas inert Analisis kualitatif & kuantitatif Untuk pemeriksaan zat yang volatil & tahan panas

21 HPLC Fase diam : padat Fase gerak : cair Analisis kualitatif & kuantitatif Untuk pemeriksaan zat yang tidak tahan panas & tidak volatil

22 Gel Permeation Chromatography (GPC) Pemisahan berdasar perbedaan ukuran partikel Pemisahan berdasar perbedaan ukuran partikel Fase diam : gel Fase diam : gel Gel berupa butiran – butiran berpori (dekstran, poliakrilamid, polistiren) Gel berupa butiran – butiran berpori (dekstran, poliakrilamid, polistiren) Fase gerak : cair Fase gerak : cair Contoh : pemisahan makromolekul (lemak, protein, garam) dari sampel Contoh : pemisahan makromolekul (lemak, protein, garam) dari sampel

23

24 TUGAS KELOMPOK PEKAN DEPAN Buatlah presentsi kelompok ±5 orang) dengan durasi 15 menit mengenai prosedur ekstraksi untuk obat dan atau metabolitnya dalam sampel biologis beserta contoh penerapannya. Buatlah presentsi kelompok ±5 orang) dengan durasi 15 menit mengenai prosedur ekstraksi untuk obat dan atau metabolitnya dalam sampel biologis beserta contoh penerapannya. Sub tema pilihan : Sub tema pilihan : Metode ekstraksi padat-cair Metode ekstraksi padat-cair Metode ekstraksi cair-cair Metode ekstraksi cair-cair Metode kromatografi Metode kromatografi Metode radiokimia Metode radiokimia Metode spektroskopi Metode spektroskopi

25 HATUR NUHUN PISAN.... Jangan lupa untuk mencari tambahan informasi dari berbagai sumber lainnya...


Download ppt "Sampel PengotorAnalit Eksogen Endogen Sensitivitas & Selektivitas PENANGANAN SAMPEL."

Presentasi serupa


Iklan oleh Google