ISOLASI DNA Nama : Yudhistira Wharta Wahyudi NIM : 105040204111013 Kelas : K Asist : Mita

Pengertian Isolasi DNA adalah pemisahan DNA untuk mengetahui sifat dari tanaman untuk rekayasa genetika.

Tahapan ada 3 tahapan dalam isolasi DNA, yaitu : Perusakan dinding sel Lisis membran sel Presipitasi.

Perusakan dinding sel Perusakan dinding sel ini menggunakan nitrogen cair yang memiliki suhu -169˚C. Penggunakan nitrogen cair dimaksudkan untuk membekukan sel, setelah sel beku lalu sel dirusak (digerus) sampai benar benar halus dengan mortar agar dinding sel rusak. Perlakuan ini dilakukan engan gesit sebelum nitorgen cair menguap.

Dokumentasi

2. Lisis Membran Sel Lisis membran sel yaitu proses untuk meluruhkan membran sel pada nukleus dengan larutan deterjen kationik (CTAB). Penggunakan CTAB berfungsi untuk mengurangi kontaminan, mengurangi browning dan untuk menjaga DNA agar tidak rusak.

3. Pemurnian Pemurnian yaitu menghilangkan beberapa kontaminan seperti senyawa sekunder (fenol), poli sakarida, Rna dan juga protein.

Pemurnian ini merupakan tahapan paling penting dalam Isolasi DNA Pemurnian ini merupakan tahapan paling penting dalam Isolasi DNA. Karena bila ada kontaminan selain DNA maka hasil isolasi DNA yang dilakukan diangap gagal. Kontaminasi ini dapat menurunkan kwalitas DNA hasil isolasi dan mengakibatkan data yang didapat tidak valid.

Dalam pemurnian juga dilakukan kegiatan Presipitasi Dalam pemurnian juga dilakukan kegiatan Presipitasi. Kegiatan ini yaitu proses pengumpulan DNA menggunakan isopropanol dingin.

Cara kerja Alat Mesin UV transluminator Mortar Mikro pipet Vortex Pastle Stirer oven Mesin UV transluminator Timbangan analitik Plastik pembungkus Tabung Ependorf Mikrowave Kamera Mesin PCR Lemari es Ingkubator Spatula Erlenmeyer Tabung reaksi

Cara kerja Bahan Daun kakao Nitrogen cair CIA CISA

Langkah kerja Timbang daun 0.5 gr gerus (+nitrogen cair dan PVP) + buffer CTAB 1 ml + beta mertcaptoethanol 5 µl Vortek, inkubasi T=650C 30 menit + CHISAM/CIA 500µl, vortek Sentrifuse 6000 rpm, 10 menit Ambil supernatan + 1 ml CHISAM Sentrifuse 8000 rpm, 10 menit Ambil fase atas + 1 ml isopropanol dingin, inkubasi freezer 30 menit Ambil pelet dan buang supernatannya + 200µl buffer pencuci (2x) Endapan dikeringanginkan + 500µl buffer TE (resuspensi DNA) + 1µl RNASE, inkubasi T=350C, 30 menit Setelah dingin + ethanol dingin, inkubasi dalam freezer 30 menit Resuspensi 200µl buffer TE Elektroforesis

Metode isolasi Dna yang saya ikuti, mengikuti alur kerja dari Karsinah Metode isolasi Dna yang saya ikuti, mengikuti alur kerja dari Karsinah. Mungkin dari buku atau jrnal lain akan beda alur kerja dan perlakuannya serta berbeda setiap komoditas yang digunakan.

TERIMA KASIH