DWI ANITA SURYANDARI Departemen Biologi Kedokteran FKUI DISTRIBUSI GENOTIP CYP2E1 PADA PENDERITA KANKER NASOFARING DARI SUKU SUNDA DAN NON SUNDA DWI ANITA SURYANDARI Departemen Biologi Kedokteran FKUI

KARSINOMA NASOFARING  tumor ganas pada sel epitel nasofaring. Etiologi : infeksi EBV, kekerapan konsumsi makanan mengandung nitrosamin. Diagnosis : berdasar uji serologi,biopsi, PCR. Terapi : radiokemoterapi (efektif).

INFEKSI EBV Hampir 90% populasi manusia di dunia terinfeksi EBV. EBV : (hospes spesifik). Infeksi pada anak-anak  asimptomatik Imunitas Infeksi pada dewasa muda  mononukleosis (L)

PETA DISTRIBUSI KNF Eropa Amerika Utara 1/100rb 1/100rb Cina Selatan Thailand 3/100rb Indonesia 4,7/100rb

MULTIFAKTORIAL KNF K N F INFEKSI EBV FAKTOR & LINGKUNGAN KARSINOGEN NITROSAMIN GEN VIRUS FAKTOR GENETIK POLIMORFISME GEN CYP2E1 GEN PEJAMU

Studi pendahuluan : penderita KNF di Indonesia (RSCM) pada suku sunda lebih banyak daripada suku non Sunda. Masalah : Bagaimana distribusi genotip CYP2E1 pada penderita KNF suku Sunda dan non Sunda? Apakah genotip dan alotip CYP2E1 berasosiasi dengan suseptibilitas individu terhadap KNF?

GEN CYP2E1 Lokasi : 10q24.3-q terminal, 9 exon dan 8 intron (11,8 kb) Polimorfik = Substitusi 7668T-A pada intron 6

PETA RESTRIKSI CYP2E1 C D Dra I 874 pb 121 pb Dra I Dra I 302 pb 572 pb 121 pb

Kontrol negatif (campuran pereaksi PCR tanpa sampel DNA) ISOLASI DNA AMPLIFIKASI GEN CYP2E1 PCR Mix: (Sampel DNA; PCR green Go Taq buffer 1X; 1,5 mM MgCl2; 0,2 mM dNTP; 0,4 pmol/µl primer F, primer R ; 0,25 unit enzim DNA polimerase Taq; dan ddH2O steril sampai volume total 25 µl). ELEKTROFORESIS Gel agarosa 2% (b/v) Kontrol negatif (campuran pereaksi PCR tanpa sampel DNA) - Produk PCR/RFLP Kontrol negatif Penanda berat DNA X174RF/HaeIII Kontrol positif Denaturasi awal Denaturasi Ekstensi akhir 95o C 5’ 94o C 1’ Ekstensi 72o C 2’ 72o C 7’ Elektroforesis dengan tegangan 90 V selama 50 menit. 60o C 2’ Annealing 4o C  Divisualisasikan di bawah iluminator UV dan difoto dengan Film Polaroid 667 ISO 3000 8,5 x 10,8 cm Black and White Instant Pack Film menggunakan kamera Polaroid. 30 siklus

Hasil digesti enzim DraI pada sekuen gen CYP2E1 4 5 6 7 8 500 pb 572 pb 200 pb 121 pb 302 pb 100 pb 874 pb DD DC CC

Sebaran umur kelompok KNF dan Kontrol

Perbandingan distribusi genotip dan alotip gen CYP2E1 pada kelompok KNF dan Kontrol.

tidak ada perbedaan secara bermakna distribusi genotip dan alotip gen CYP2E1 antara kelompok penderita KNF dengan kelompok kontrol.

Perbandingan genotip dan alotip CYP2E1 pada kelompok kontrol suku Sunda dan nonSunda Tidak ada perbedaan secara bermakna genotip dan alotip CYP2E1 pada kelompok kontrol suku Sunda dan non-Sunda.

Perbandingan genotip dan alotip CYP2E1 pada kelompok KNF suku SUnda dan nonSunda

Chi square ,CI 95% , α = 0,05 diperoleh nilai p = 0 Chi square ,CI 95% , α = 0,05 diperoleh nilai p = 0.1846 ( p>0,05)  distribusi alotip antara suku Sunda dengan non-Sunda pada kelompok penderita KNF : tidak ada perbedaan secara bermakna. Gambar 20. Grafik perbandingan distribusi alotip gen CYP2E1 antara suku Sunda dan non-Sunda pada kelompok KNF.

KESIMPULAN Distribusi genotip DD:DC:CC pada kelompok penderita KNF adalah 70%:26%:4% dan distribusi alotip D : C adalah 83% :17%. Frekuensi alel C pada suku Sunda cenderung lebih tinggi daripada non-Sunda dan berbeda bermakna pada p<0,10. Genotip dan alotip CYP2E1 tidak berhubungan dengan suseptibilitas individu terhadap KNF.

MANFAAT PENELITIAN : Hasil penelitian ini merupakan data awal tentang pola distribusi alel gen CYP2E1 pada populasi di Indonesia. Diharapkan data ini dapat digunakan sebagai acuan penelitian keganasan lainnya yang dihubungkan dengan aktivitas enzim CYP2E1. Dapat dimanfaatkan sebagai bahan konseling bagi keluarga penderita KNF agar dapat mengambil tindakan preventif untuk meminimalkan resiko terkena KNF.

KARSINOGEN DALAM MAKANAN – KEGANASAN IKAN ASIN (NITROSAMIN) NELAYAN HONG KONG (Ho,1972) TIKUS (Huang, 1978) KARSINOMA NASOFARING KARSINOMA KAVUM NASALIS

NITROSAMIN Dapat terbentuk pada saat pemanasan protein terdapat dalam makanan yang diawetkan, diasapi, Dan pada asap rokok

Terbentuknya Nitrosamin NITRAT/ NITRIT SENYAWA AMIN NITROSAMIN G.I. NITRIT ALKILAMIN (IKAN ASIN) NITROSAMIN

Extensive metabolizers FAKTOR GENETIK PEJAMU METABOLISME OLEH CYP NITROSAMIN TUBUH POLIMORFISME GEN CYP2E1 Poor metabolizers (PM) Extensive metabolizers (EM)

Neoplasma t’diferensiasi KARSINOGENESIS ZAT KIMIA PROKARSINOGEN excresi Zat kim yg diexcresi bioaktivasi Metabolit antara Metabolit Reaktif (karsinogen akhir) ZAT KIMIA T’konjugasi Ik.kov dg GSH/fenol P’ikatan thd makromol Makromolekul dlm ∆ (bhn gntk yg b’∆) Makromol yg Telah b’ubah Replikasi perbaikan Inisiasi Sel Tumor Bhn gntk yg pulih (sel Normal) Promosi Neoplasma t’diferensiasi Konversi & pkb KANKER

Hasil sekuensing gen CYP2E1 (dari lembaga Biologi molekuler Eijkman)

Hasil sekuensing (dari LBM.Eijkman)