KINETIKA ENZIM Penting untuk : Memahami fungsi katalitik Memahami fenomena biologik, pengaruh suhu, pH dll. Prosudur pemurnian enzim

Pengukuran aktivitas enzim: Berdasar pada aktivitasnya. 1 IU, micromol P/menit Pada enzim tertentu : 1 IU, perobahan kepekatan pada 340nm sebesar 0,001 per menit Kecepatan reaksi : jumlah substrat yg diubah per satuan waktu jumlah produk yg terbentuk per satuan waktu

Kecepatan awal : Pada waktu kadar substrat, produk dan enzim, suhu, pH dapat diketahui dengan tepat. Pada awal reaksi. Pada waktu kurve perjalanan masih lurus. Biasanya berkurangnya substrat < 10%. Cara mengukur kecepatan awal Ambil bagian pada kurve perjalanan yang masih Berupa garis lurus (pada awal reaksi) Kecepatan awal berbanding lurus dengan kadar enzim

Pengaruh kadar substrat terhadap reaksi enzimatik Melakukan beberapa kali percobaan kondisi sama kecuali kadar substrat Kadar substrat absis ( x ) Kecepatan awal Vo ordinat ( y ) Kurve berbentuk hiperbola

Persamaan Michaelis-Menten Vomax [S] Vo= ---------- Km + [S] Apabila [S] <<< Km [S] >>> Km [S] = Km

[S] <<< Km

Double reciprocal atau Lineweaver-Burk plot

Pengaruh pH terhadap reaksi enzimatik pH mempengaruhi muatan Muatan mempengaruhi struktur enzim Selanjutnya akan mempengaruhi reaksi E S Akibatnya kecepatan reaksi dipengaruhi

Pengaruh pH Pepsin pH optimum 1,6 2) Glukosa 6 fosfatase pH optimum 7,8

Pengaruh temperatur Makin tinggi temperatur Makin mudah rusak Enzim lebih stabil pada Temperatur yang rendah

INHIBITOR Berdasar ikatan enzim : -inhibitor reversibel -inhibitor irreversibel Berdasar sifat kinetika : -inhibitor kompetitif -inhibitor nonkompetitif

INHIBITOR KOMPETITIF Selalu bersifat reversibel E + I  EI ES + I +

Inhibitor kompetitif reversibel Efeknya dapat dihilangkan dengan menambah substrat Analog substrat : Strukturnya mirip substrat Terikat di aktif site

E + I  EI ES + I  ESI Inhibtor nonkompetitif : a) Inhibitor nonkompetitif reversibel Dpt berikatan dgn E bebas juga dengan ES komplek E + I  EI ES + I  ESI Terikat tidak pada aktif site Strukturnya tidak mirip substrat

Inhibitor nonkompetitif irriversibel Berikatan dgn enzim secara irriversibel Merobah seluruh konformasi enzim Enzim menjadi inaktif Secara kinetika mirip nonkompetitif reversibel Menurunkan Vmax Tidak menurunkan Km Contoh : Hg++, Ag++, Ba++