ASPEK LABORATORIUM DEMAM BERDARAH DENGUE ANDRI

Taksonomi Dengue Family : Flaviviridae Genus : Flavivirus Spesies : Dengue virus

Infeksi Virus Dengue Disebabkan oleh virus Dengue RNA virus Disebarkan oleh Aedes aegypti Terdapat 4 serotype ; Den-1, Den-2, Den-3, Den-4 Kasus I dilaporkan di Asia tahun 1780 Di Indonesia 1968 di Surabaya, konfirmasi virologi tahun 1970

Nyamuk Betina Ae.aegypti Virus Dengue ditransmisikan oleh nyamuk betina Ae.aegypti Terutama di siang hari Telur dan larva diletakkan pada wadah buatan

Patofisologi Infeksi Virus Dengue Teori Enhancing antibody oleh Halstead Teori virulensi oleh Rosen

TEORI ENHANCING ANTIBODY SECONDARY HETEROLOGOUS DENGUE INFECTION REPLIKASI VIRUS ANAMNESTIC ANTIBODY RESPONE KOMPLEKS VIRUS ANTIBODY AGREGASI TROMBOSIT AGREGASI TROMBOSIT AKTIVASI KOAGULASI AKTIVASI KOAGULASI AKTIVASI KOMPLEMEN AKTIVASI KOMPLEMEN PENGHANCURAN TROMBOSIT OLEH RES PENGHANCURAN TROMBOSIT OLEH RES PENGELUARAN PLATELET FAKTOR III PLASMA AKTIVASI FAKTOR HAGEMAN TROMBOSITOPENIA KOAGULOPATI KONSUMTIF ANAFILATOKSIN SISTEM KININ PENINGKATAN PERMEABILITAS KAPILER KININ GANGGUAN FUNGSI TROMBOSIT GANGGUAN FUNGSI TROMBOSIT PENURUNAN FAKTOR PEMBEKUAN PENURUNAN FAKTOR PEMBEKUAN FDP MENINGKAT PERDARAHAN MASIF PERDARAHAN MASIF SYOK

Manifestasi Klinis Demam Sakit kepala Mual Sakit di belakang mata Dehidrasi Epistaksis Kebocoran plasma Ptechie/purpura Respiratory distress

Klinis dan Laboratorium Infeksi Virus Dengue

Terapi Tidak terdapat terapi spesifik Hanya terdapat terapi untuk memperbaiki manifestasi klinis yg ada Cairan pengganti, anti piretik, transfusi trombosit jika perlu Hindari pemberian aspirin

Preventif Eliminasi tempat berkembang nyamuk Hindari gigitan nyamuk Tidak diperlukan imunisasi

Pemeriksaan Laboratorium Pem Leukosit TEST TOURNIQUET TROMBOSIT PEMERIKSAAN HEMATOLOGI Hematokrit SEDIAAN HAPUS DARAH TEPI www.themegallery.com

Hemagglutination inhibition test Rapid Immunochromatographic Test ELISA Rapid Immunochromatographic Test PEMERIKSAAN SEROLOGI

Kultur Virus RT-PCR DIAGNOSIS PASTI

Tes Tourniquet : Menilai gangguan vaskuler Hasil normal jika ptekie yg timbul dalam lingkaran diameter 5 cm posisi 4 cm bawah lipatan siku < 5 Hasil positif terdapat pada pula pada infeksi virus lainnya dan defisiensi vitamin C

Tes Tourniquet

Pemeriksaan Jumlah Leukosit : Leukopeni Shift to the left Limfositosis Atau limfofeni Tidak Spesifik

Kadar Hematokrit : Hemokonsentrasi Indikator perembesan plasma Terjadi peninkatan > 20% Normal : ♀ : 35%-45% ♂ : 40%-50%

Jumlah Trombosit : Terjadi trombositopenia Muncul antara hari ke-3 sampai hari-7 demam Penyebab : virus Dengue & antibodi anti trombosit

Gambaran Darah Tepi Limfosit Plasma Biru Respons imun spesifik virus dengue terhadap limfosit Proliferasi & transformasi sel menjadi besar RNA >>> Pewarnaan Romanowsky, sitoplasma biru Mulai timbul hari 3-6 LPB > 15% limfosit, atau > 4% leukosit

Limfosit Plasma Biru

LPB pewarnaan Wright Giemsa LPB pewarnaan May Grunwald

Variasi Bentuk LPB Limfosit & LPB

Hemagglutination test Baku emas WHO Metode Clark & Cassal Menetapkan titer antibodi-anti Dengue yg dapat menghambat kemampuan virus Dengue menaglutinasi eritrosit angsa Serum diambil sepasang Serum I saat akut (pasien datang) Serum II konvalesen (2-3 minggu dr saat sakit) Interval minimal 7 hari, optimal 10 hari

Interpretasi Hasil

Antigen-Antibodi Dengue

ELISA Deteksi antibodi : Indirect ELISA untuk IgG anti Dengue IgM anti Captured (MAC ELISA) dan IgG anti Captured ELISA

Indirect IgG : Deteksi 100% setelah hari ke 7 demam Direkomendasikan jika IgM Dengue masih negatif setelah 7 hari Spesifitas kurang, reaksi silang dg flavivirus IgG antibodi capture ELISA merupakan pengembangan dari indirect IgG untuk kasus infeksi sekunder

MAC- ELISA : Digunakan untuk kasus infeksi primer 55% terdeteksi hari 4-7 demam 100% terdeteksi hari 7 demam Untuk kasus infeksi sekunder, 78% terdeteksi hari 7 demam 28% kasus infeksi sekunder tidak terdeteksi jika menggunakan IgM saja Positif palsu penyakit otoimun

Rekomendasi Pemeriksaan IgM & IgG Lakukan pemeriksaan IgM Dengue segera pada pasien tersangka IgM dengue biasanya positif hari 5-7 demam Hasil IgM negatif pada pasien dg demam < 5 hari tidak mengekslusi infeksi Dengue Jika IgM Dengue negatif sebelum 7 hari demam, sampel diulang pada fase pemulihan untuk konfirmasi

Deteksi antigen : Deteksi antigen menggunakan mAb spesifik Paling sering dipakai adalah NS1 antigen untuk diagnosis awal infeksi Dengue Tidak dapat mengidentifikasi serotipe

NS1 merupakan glikoprotein yg penting bagi viabilitas virus Sekresi protein NS1 merupakan penanda khusus infeksi flavivirus Deteksi infeksi primer 75%-97,3% lebih baik dari deteksi infeksi sekunder (60%- 70%) Sensitivitas berkurang pada hari 4-6 demam Tidak terdeteksi pada fase konvalesen

Rapid Immunochromatographic Test (ICT) Mudah dikerjakan Mahal NS1 antigen IgM & IgG Dengue Prinsip pemeriksaan sama dg Capture ELISA

Positif Palsu ICT : Reaksi silang dg Flavivirus Non-Flavivirus : malaria, leptospirosis, toxoplasmosis, sifilis Connective tissue disorder : RA

Isolasi Virus : Diagnosis pasti Pengambilan sampel dalam 5 hari demam Bahan isolasi virus : serum, plasma, atau lapisan buffy-coat darah heparin Kultur sel yg paling banyak digunakan dari sel AP/61, C6/36, TRA-284-SF Hasil kultur diidentifikasi menggunakan immunoflouresens DFA atau IFA Keterbatasan : peralatan sulit, waktu 2-3 minggu

RT-PCR : Virus RNA, menggunakan reverse transcription polymerase chain reaction agar terbentuk cDNA & amplifikasi dg DNA thermal cycler Mengidentifikasi serotipe virus Dengue : Den1, Den2, Den3, dan Den4 Diagnosis awal (< 5 hari demam) Sensitivitas 100% pada demam < 5 hari, berkurang menjadi 70% hari 6

Keterbatasan RT-PCR : Hanya tersedia di tempat tertentu dg personel terlatih Mahal Spesimen harus punya penyimpanan khusus, waktu transportasi pendek Tidak direkomendasikan sebagai pemeriksaan rutin

TERIMA KASIH