Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

Metode Mikrobiologis-2. 8. Enumerasi mikrobia Total counts  Breed slide method  Petroff-Houser chamber  Haemocytometer Viable count  Spread-plate.

Presentasi serupa


Presentasi berjudul: "Metode Mikrobiologis-2. 8. Enumerasi mikrobia Total counts  Breed slide method  Petroff-Houser chamber  Haemocytometer Viable count  Spread-plate."— Transcript presentasi:

1 Metode Mikrobiologis-2

2 8. Enumerasi mikrobia Total counts  Breed slide method  Petroff-Houser chamber  Haemocytometer Viable count  Spread-plate technique  Pour-plate technique  Filtration  MPN (Most Probable Number) Berat kering Spectrophotometric

3 Breed’s Slide method •Sejumlah volume (0,1 ml) sampel dibuat preparat smear di atas gelas benda dengan luas tertentu (1 x 4 cm 2 ) •Difiksasi, lalu diwarnai dan dikeringkan •Diamati di bawah mikroskop cahaya •Densitas bakteri (sel/ml) = (A s x N)/(A f x V)  N: jumlah rerata sel/bidang pandang (sel)  A s : Luas area smear (A s = 400 mm 2 )  A f:: Luas bidang pandang (mm 2 )  V: volume sampel (ml)  DF: (dilution factor) = faktor pengenceran •Densitas (sel/ml) = (400 x N x)/(A f ) (x 1/10) •Densitas (sel/ml) = (400 x N x)(10)/(A f ) •Densitas dalam suspensi (sel/ml) = (400 x N x DF x 10)/(A f )

4 Total count: Petroff-Hauser Chamber

5 Haemocytometer

6 Total count: Haemocytometer •Luas kotak di tengah (L 1 ) = 1 mm 2 (dibagi 25 = 1/25 mm 2 ) •Kedalaman (d) = 0,02 mm •Volume (V 1 ) = 1mm 2 x 0,02 mm = 0,02 mm 3 = 0,02 x cm 3 (1 cm 3 = 1000 mm 3 ) = 2 x cm 3 (= 2/10 5 cm 3 =2/ cm 3 ) =1/ cm 3 = 1/ ml Contoh: Jika jumlah sel dalam kotak (L1) = 28 sel (= 28 per 1/ ml) = 28 x sel/ml = sel/ml

7 Bidang Pandang

8 •Luas kotak (L 2 ) = 1/25 mm 2 •Kedalaman (d) = 0,02 mm •Volume (V 2 ) = 1/25mm 2 x 0,02 mm = 8 x mm 3 = 8 x x cm 3 = 8 x cm 3 = 8 x ml = 8/10 7 ml = 1/ ml Contoh: Jika jumlah sel dalam kotak (L 2 ) = 28 sel (= 28 sel per 1/ ml) = 28 x sel/ml = sel/ml

9 •Luas kotak (L 3 ) = 1/400 mm 2 •Kedalaman (d) = 0,02 mm •Volume (V 3 ) = 1/400 mm 2 x 0,02 mm = 5 x mm 3 = 5 x x cm 3 = 5 x cm 3 = 5 x ml = 5/10 8 ml = 1/ ml Contoh: •Jika jumlah sel dalam 5 kotak (L2) = 500 sel •Dalam 5 kotak L 2 terdapat: 5 x 16 kotak L 3 = 80 kotak L 3 •Maka Jumlah rerata sel per kotak L 3 = 500/80 sel/(1/ ml) = 6,25 sel/(1/ ml) = 6,25 x sel/ml

10 Petroff-Hausser Chamber Luas kotak terkecil (L) = 1/400 mm 2 ; Kedalaman (d) = 0,200 mm Volume kotak terkecil (V) = 1/400 x 0,200 mm 3 = 1/400 x 2/10 mm 3 = (1/400 x 2/10) x 1/1.000 cm 3 = (2/4000) x 1/1000 cm 3 = 2/ cm 3 = 1/ ml

11 Haemocytometer Luas kotak terkecil (L) = 0,025 mm 2 ; Kedalaman (d) = 0,1 mm = 1/10 mm = 1/400 mm 2 Volume kotak terkecil (V) = 1/400 x 1/10 mm 3 = 1/4.000 mm 3 = (1/4.000) x 1/1000 cm 3 = 1/ cm 3 = 1/ ml

12 Haemocytometer

13 Bidang pandang

14 Spermatozoa

15 Viable count •Metode Pengenceran sample •Plating pada medium padat dan diinkubasikan •Hitung jumlah koloni •Kerapatan mikrobia/ml sample dapat dihitung: = jumlah koloni x faktor pengenceran e.g. jika sampel yang diencerkan x diinokulasikan sebanyak 0,1 ml ke dalam medium padat. Setelah diinkubasikan ditemukan sejumlah 50 koloni. Berapakah kerapatan mikrobia per ml atau gram sampel ?

16

17

18 Plate Count

19

20 HPC: Heterotrophic Plate Count

21 Persayaratan Plate Count 1.Jumlah koloni/petridish 30 – 300, jika tidak ada yang memenuhi, dipilih ang terdekat 2.Koloni spreader tidak dipakai 3.Perbandingan hasil pengenceran yang berurutan:  jika  2 : hasilnya direrata  jika > 2 : dipakai pengenceran yang lebih kecil 4. Jika ada ulangan maka jumlah koloni direrata

22 Perhitungan PengenceranJumlah koloni/Petridish Kerapatan sel (cfu/ml) spreader

23 Membran filter Kerapatan sel sangat rendah: •Sejumlah volume sampel difilter •Filter diletakkan di atas medium •Dihitung jumlah koloni yang tumbuh •Dihitung kerapatan per volume sampel N.B. Metode ini digunakan jika kerapatan mikrobia dalam sampel sangat rendah !

24 Metode MPN  Sampel diencerkan lalu diinokulasikan ke dalam medium cair  Diinkubasikan lalu di amati adanya pertumbuhan mikrobia  Kerapatan dihitung berdasarkan jumlah sampel yang positif tumbuh Jumlah tabung positif di antara 5 ulangan masing2 pengenceran Jika dipilih ; dengan pengenceran 10 -4, dan maka angka MPN untuk tiap 100 gram atau ml sampel: 280 x 10 5 /100 ml sampel Angka 280 diperoleh dari Tabel MPN (Hoskins)

25 Metode Berat Kering (Biomasa) •Kultur mikrobia disample dengan volume tertentu (ml) •Dikeringkan pada 80°C sampai beratnya konstan •Kerapatan dinyatakan dengan mg- DCW/ml atau g-DCW/ml

26 Metode Spektrofotometri •Kultur cair mikrobia diambil •Dimasukkan ke dalam kuvet •Dibaca nilai OD pada panjang gelombang tertentu, mis OD-600 nm •OD: Optical Density

27 9. Karakterisasi dan Identifikasi Metode konvensional-tradisional Metode Kimiawi Metode Molekular

28  Identification of microorganisms can be based on various characters: › Morphology: rely on morphological characters › Physiology and metabolic: obtained by growing microorganisms on various media and under various growth condition › Serology: based on running immunological reaction › Genetic

29

30 OF TEST MICROTITER PLATE INDOLE TEST

31 Salmonella serological reaction

32

33


Download ppt "Metode Mikrobiologis-2. 8. Enumerasi mikrobia Total counts  Breed slide method  Petroff-Houser chamber  Haemocytometer Viable count  Spread-plate."

Presentasi serupa


Iklan oleh Google