Dibimbing oleh : Dr. Ir. Tatik Chikmawati, M.Si Laporan Kemajuan PKMP Uji Aktivitas Ekstrak Buah Sirih (Piper bettle) Asal Nusa Tenggara Terhadap Pertumbuhan Sel Tumor mammary Mencit C3H Disusun oleh: Seztifa Miyasyiwi (G34070061/2007) Maulida Mulya R. (G34070038/2007) Ita Purnamasari (G34070042/2007) Sepriyadi Rihi (G34070012/2007) Ruri Arimbi (G34060327/2006) Dibimbing oleh : Dr. Ir. Tatik Chikmawati, M.Si

DAFTAR ISI Pendahuluan Target Luaran Metode Sasaran Kegiatan Ketercapaian Target Luaran Permasalahan & Penyelesaian Penggunaan Biaya     PKM-P 2010

PENDAHULUAN Potensi tanaman sirih: Mengandung senyawa-senyawa berkhasiat (minyak atsiri, senyawa kavikol, fenil propana, tanin, diastase, gula, dan pati) Mampu mengobati beberapa penyakit Namun, Pemanfaatan buah sirih belum teridentifikasi

TARGET LUARAN Menambah informasi mengenai Buah sirih dan tumor mammary Pengembangan manfaat buah sirih metode ekstraksi buah sirih yang tepat untuk kepentingan masyarakat

METODE Pembuatan ekstrak Buah sirih dengan metode maserasi Ekstrak kasar Buah sirih Penapisan fitokimia untuk menguji adanya alkaloid, flavonoid, tanin, saponin, sterol/terpenoid Pemberian ekstrak Buah sirih dengan sistem cekok Preparasi jaringan tumor kelenjar mamari mencit Pengamatan makroskopis Pertambahan berat badan dan pertambahan volume tumor Presentase mitosis dan apoptosis

METODE (Ekstraksi Buah Sirih) Pengeringan dengan oven pada suhu <600C selama 7 hari Penghancuran dengan blender Maserasi dengan etanol teknis 70%, 593 gram serbuk dalam 5 liter EtOH Shaker selama 24 jam pada 600 rpm Saring dengan 2 kali penyaringan Pemekatan dengan rotary evaporator pada suhu 600C selama 4 jam dengan kecepatan 200 rpm Pemekatan dengan Freeze dryer selama 48 jam Simpan pada 40C

METODE (Transplantasi Tumor) Mencit C3H donor dianestesi dengan eter Kulit pada bagian bertumor diolesi dengan alkohol 70%, selanjutnya dibuat sayatan lurus untuk mengeluarkan tumor Jaringan tumor disimpan di atas cawan petri yang diletakkan di atas es Dipilih jaringan yang masih dalam kondisi baik yaitu, bagian yang tanpa nekrosis Jaringan tumor dibersihkan dari darah dan jaringan ikat Jaringan dicacah halus hingga terbentuk suspensi tumor yang partikelnya dapat melewati jarum trokar Transplantasi o,2 ml suspensi tumor ke mencit resipien secara subkutaneus pada daerah aksila

METODE (Pemberian Ekstrak Buah Sirih) 0,1 ml ekstrak Buah sirih dosis 1,5 g/l dan 4 g/l Dicekokkan ke mencit setelah 7 hari masa laten transplantasi tumor Pencekokkan dilakukan selama 21 hari Selama pencekokkan diukur berat badan mencit dan ukuran tumor Pemberian pakan sebanyak 5gr/hari dan aquades untuk minum diberikan secara ad libitum

METODE (Tahap Preparasi) Jaringan tumor hasil pembedahan diletakkan dalam kaset Direndam dalam seri larutan formalin 70%, alkohol 80% dan alkohol 95%, alkohol absolut Direndam dalam xylol dengan dua kali ulangan Infiltrasi dengan parafin cair pada suhu maksimum 600C Embedding Blok parafin yang telah memadat disayat setebal 4 mm dengan menggunakan mikrotom putar Sayatan direkatkan diatas gelas objek dengan batuan Meyer’s albumin Penutupan dengan cover glass dengan media entellan, dan Pemberian label Pewarnaan hematoxilin-eosin

METODE (Pengamatan Mikroskopis) Presentase mitosis Preparat Jaringan Tumor (Σsel mitosis / Σsel total) x 100% Presentase Apoptosis (Σsel apoptosis / Σsel total) x 100%

KETERCAPAIAN TARGET LUARAN Tabel 1 Hasil Uji Fitokimia Buah Sirih (Piper betle) Nama senyawa kimia Pereaksi Hasil (warna dan busa) Keterangan Alkaloid Meyer Wagner Dragendorf Endapan putih kekuningan Endapan Cokelat Endapan Orange + Flavonoid H2SO4 Pekat dan methanol Merah kecokelatan Fenol hidrokuinon NaOH 10% Merah Kehitaman Tanin FeCl3 1% Hitam Steroid Lieberman Buchard Hijau Saponin Pemanasan Aquades Berbusa Flavonoid lain Aquades+Mg+Amil alcohol Lapisan atas akan menjadi lebih pekat dibandingkan dengan lapisan bawah

KETERCAPAIAN TARGET LUARAN Tabel 2 Hasil Pengamatan Makroskopis Pemberian Ekstrak Buah Sirih Terhadap Perkembangan Tumor Mammary pada Mencit C3H Tanggal penimbangan Ulangan Perlakuan ke- Konsentrasi ekstrak biji sirih yang diberikan (ppm) Berat badan mencit C3H (gr) Luas permukaan tumor mammary (mm2) 19 April 2010 I 1 150 16,9 3,65 x 3,62 2 21 3,91 x 5,49 II 4 x 103 23 3 x 3,13 20,5 2,76 x 5,49 Kontrol 4,22 x 6,53 22 April 2010 16,8 3,07 x 2,99 20,7 4,96 x 6,19 24,5 2,73 x 5,17 21,2 3,51 x 5,46 22 4,93 x 6,17 26 April 2010 16,4 3,44 x 4,62 4,58 x 5,94 27,6 3,77 x 4,58 21,3 3,95 x 6,51 4,75 x 5,05 29 April 2010 17,5 3,30 x 4,04 4,58 x 5,56 28 3,63 x 3,89 22,7 4,68 x 7,58 4,58 x 5,58

KETERCAPAIAN TARGET LUARAN Pada perlakuan dengan 0,1 mL dan 0,2 mL untuk masing-masing 1,5 gr/L dan 4 gr/L ekstrak tidak menimbulkan kematian pada mencit C3H 0,2 cc 0,1 cc 4 gr/L ekstrak 1,5 gr/L ekstrak Mencit Tetap hidup

Administrasi Teknis PERMASALAHAN & PENYELESAIAN Permasalahan administratif relatif tidak memengaruhi proses penelitian Teknis Permasalahan: Metode yang diajukan dalam proposal kurang cocok untuk pengujian ini. Sehingga dilakukan perubahan metode Penyelesaian : Perubahan metode yang digunakan dalam proses ekstraksi dan proses pengujiannya pada mencit

Organisasi Pelaksanaan PERMASALAHAN & PENYELESAIAN Organisasi Pelaksanaan Permasalahan: Uji tumor lidah tidak dapat dilakukan secara in vitro. Implantasi tumor lidah pada mencit sukar dan tidak terdapat galur yang cocok sebagai hewan pengamatan pertumbuhan tumor lidah. Penyelesaian: Pengujian pengaruh ekstrak buah sirih pada tumor lidah diganti dengan menggunakan tumor mammary. Pengujian dilakukan terhadap mencit dengan galur C3H. Penggantian ini diharapkan dapat mengetahui efektivitas ekstrak buah sirih

Keuangan PERMASALAHAN & PENYELESAIAN Permasalahan. Biaya penelitian yang didapat tidak sebesar biaya yang diajukan dalam proposal Penyelesaian. Melakukan peminjaman dana ke departemen Biologi dan menggunakan dana mandiri. Beberapa rencana pendanaan/pengeluaran dikurangi untuk menghemat penggunaan dana.

PENGGUNAAN BIAYA Nama Bahan Keterangan Harga Buah Sirih asal Nusa Tenggara Barat 7 Kg - Rp. 800.000 Pembuatan Ekstrak sampai Uji Fitokimia Rp. 1.500.000 Pengujian Sel tumor Donor @60.000 Resipien @50.000 x 12 = 600.000 Perawatan @ 5000/hari x 21 x 12 = 1260.000 Preparasi @ 25.000 x 5 = 125.000 Transplantasi Tumor ke 12 mencit = 775.000 Rp. 2.760.000

PENGGUNAAN BIAYA Nama Bahan Keterangan Harga Freeze drying @ 5000/jam x 48 = 240.000 Rp. 240.000 Dokumentasi Pembelian Baterai Charger Rp. 100.000 Administrasi Pembuatan Proposal awal = 25.000 Pembuatan Laporan Kemajuan = 15.000 Surat izin =10.000 Rp. 50.000 Transportasi Perjalanan pulang pergi ke Fakultas kedoteran Universitas Indonesia (Salemba) Rp. 150.000 TOTAL Rp. 5.600.000

KEGIATAN YANG TELAH TERLAKSANA No. Nama Kegiatan Waktu Keterangan 1. Konsultasi dan Perizinan Laboratorium Bulan 1 Laboratorium kimia analitik 2. Pemesanan biji sirih ke NTT dan pengambilannya di bandara, Jakarta Bulan 1 minggu ke 4 3. Tahap pemotongan dan pengeringan biji sirih selama 7 hari dengan menggunakan oven lampu Bulan 2 minggu ke 1 4. Pemesanan Mencit di Lab Patologi Anatomik Eksperimental FKUI Laboratorium anatomik eksperimental FKUI 5. Penyerahan proposal dan surat untuk kelengkapan admisnistrasi perizinan penelitian di Lab Patologi Anatomik Eksperimental FKUI Bulan 2 minggu ke 1 6. Pemanenan biji sirih yang telah dikeringkan dan pemblenderan Bulan 2 minggu ke 2

KEGIATAN YANG TELAH TERLAKSANA Lanjutan…… No. Nama Kegiatan Waktu Keterangan 7. Pembuatan ekstrak biji sirih Bulan 3 minggu ke 1 8. Uji fitokimia Bulan 3 minggu ke 3 9. Transplan Tumor Bulan 3 minggu ke 4 10. Perawatan Bulan 4 sampai sekarang

SIMPULAN Hasil penapisan fitokimia, buah sirih (Piper bettle) mengandung senyawa alkoloid, flavonoid, tanin, fenol hidrokuinon, steroid, dan flavonoid lain

Terima kasih “tak pernah berhenti dan tak lelah mencari”