Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt. Analisis Vitamin dan Hormon Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt.

Vitamin Vitamin C Nikotinamid Vitamin B1.HCl Vitamin B12 VIT-HOR

Vitamin VIT-HOR

Multivitamin Vit.C Vit.B2 Vit.B1 Niacin Vit.B6 Niacinamid Folic Acid VIT-HOR

Pemisahan Vitamin-Vitamin Yang Larut Air [ ion-pairing reagents ] VIT-HOR

Kolom VIT-HOR

Gambar: 1 VIT-HOR

Ion Pair Reagent Alkylamines Alkylsulfonates VIT-HOR

Vitamin B-12 VIT-HOR

dapat dianalisis secara: Vitamin B-12 Untuk Zat Tunggal, dapat dianalisis secara: Spektrofotometri UV atau Vis VIT-HOR

HPLC Multivitamin VIT-HOR

Kromatogram HPLC VIT-HOR

Hasil Pemisahan HPLC VIT-HOR

Vitamin C = Ascorbic Acid VIT-HOR

Metode Penetapan Kadar Zat Tunggal Titrasi Secara Iodimetri (Redok) Titrasi dengan Diklorofenolindofenol (DCIP) VIT-HOR

Pen. Kadar Vitamin C [ Iodimetri ] Netralisasi Timbang seksama lebih kurang 400 mg, larutkan dalam campuran 100 mL air dan 25 mL asam sulfat 2N, tambahkan 3 mL kanji LP. Titrasi segera dengan iodium 0,1N LV. Kesetaraan: - Satu (1) mL iodium 0,1N setara dengan 8,806 mg C6H8O6 [ Vitamin C ] VIT-HOR

Pen. Kadar Vitamin C [ Iodimetri ] BM = 176,13 Satu (1) mL iodium 0,1N setara dengan 8,806 mg C6H8O6 [ Vitamin C ] VIT-HOR

Metode Diklorofenolindofenol [ DCIP ] Vitamin C Ascorbic Acid Dehydroascorbic Acid HSCH2CH(SH)CH2OH : 2, 3-dithiol-Propanol Reducing agent and converts dehydroascorbic acid to ascorbic acid VIT-HOR

Titration Method for Reduced Vitamin C 1. Extract with metaphosphoric acid (HPO3) in HOAC. 2. Titrate with 2, 6-dichloroindophenol (blue). At end point, rose pink (2, 6-dichloroindophenol in acidic condition).   VIT-HOR

Oxidation and Reduction of Ascorbic Acid 2,6-dichloroindophenol H O O H Cl + O N OH H O H O H C O Cl 2 Blue Color C l O O H O N H O H + H C l O H O H C O 2 Pink color in acidic condition Extra oxidized indophenol form in the absence of ascorbic acidic gives pink color at end point VIT-HOR

Calculation for Reduced Vitamin C A = ml of 2,6-dichloroindophenol for sample titration B = ml of 2,6-dichloroindophenol for blank F = mg of ascorbic acid equivalent to 1 ml of indophenol standard solution V = Initial assay solution volume E = Number of grams X = Volume sample aliquot titrated VIT-HOR

Vitamin B1 HCl VIT-HOR

Vitamin B1.HCl Titrasi dengan NaOH Titrasi Bebas Air (dengan HClO4) TBA Metode Penetapan Kadarnya: Titrasi dengan NaOH Titrasi Bebas Air (dengan HClO4) Titrasi Argentometri

Vitamin B-1 HCl Titrasi Bebas Air (TBA) dengan HClO4, dalam asam asetat glasial, indikator p-Naftol benzein atau Quinaldin merah. -Adanya Cl, dihilangkan/diendapkan dg pe + an (CH3COO)2Hg. Mengapa ? Kesetaraan: 1 mL 0,1 N HClO4  0,1 x BM/2 mg Vit B1 VIT-HOR

Vitamin B1 HCl Klorin total dalam Vitamin B1 dapat ditentukan dengan: -melarutkan dalam air + asam nitrat encer + larutan AgNO3 >>>, ttt. Endapan yang terbentuk disaring, dicuci dengan air. Cairan hasil cucian (sisa AgNO3) dititrasi dengan NH4CNS. Kesetaraan: 1 mL 0,1 N AgNO3  35,46 mg klorin VIT-HOR

Vitamin B1 HCl Klorin sebagai hidroklorid ditentukan dengan cara titrasi menggunakan 0,1 N NaOH, indikator biru brom timol. Kesetaraan: 1 mL 0,1 N NaOH  35,46 mg klorin VIT-HOR

Thiamin HCl VIT-HOR

Tiokrom Fluorescensi Biru

PK. Obat Secara Spektrofluorometri

PK. Riboflavin

Riboflavin  nm 222 942 267 873 371,5 277 445 324

VIT-HOR

VIT-HOR

PK. Spektrofluorometri (Fluorescensi : hijau kekuningan) Riboflavin PK. Spektrofluorometri dalam asam asetat 5 %, eksitasi = 445 nm emisi = 530 nm (Fluorescensi : hijau kekuningan)

Intensitas fluorescensi Riboflavin Riboflavin (µg/mL) Intensitas fluorescensi 0,10 5,8 0,20 12,2 0,40 22,3 0,80 43,3 .... ? 15,4 Y = 52,9739 X + 1,0348 ; r = 0,999;  = 88,90 Kadar = 0,27 (µg/mL)

Riboflavin Bila intensitas fluorescensi dibagi : 100 Riboflavin (µg/mL) Intensitas fluorescensi 0,10 0,058 0,20 0,122 0,40 0,223 0,80 0,433 .... ? 0,154 Y = 0,5297 X + 0,0104 ; r = 0,999;  = 27,90 Kadar = 0,27 (µg/mL)

Tabel : Koef. Korelasi [r] db 0,10 0,05 0,02 0,01 0,001 1 0,988 0,997 0,999 1,000 2 0,900 0,950 0,980 0,990 3 0,805 0,878 0,934 0,959 0,992 4 0,729 0,811 0,882 0,917 0,974 5 0,669 0,754 0,833 0,874 0,951 . 20 0,360 0,423 0,492 0,537 0,652 p

Y = b X + a Y = nilai respon X = kadar senyawa baku r = koefisien korelasi db = derajad bebas p = taraf kepercayaan / limit of confidence

db = n - 2 Literatur : Skoog, D.A., 1985, Principles of Instrumen- tal Analysis, Third Edition, Sounders College Publishing, New York. Harris, D.C., 1987, Quantitative Chemical Analysis, Second Edition, W.H. Freemand and Company, New York. Miller, J.C. and Miller, J.N., 1988, Statistical for Analytical Chemistry, Second Edition, John Wiley & Sons, New York.

Labu Takar TC 20 OC VIT-HOR

Metode Titrasi DiValidasi Perlukah Metode Titrasi DiValidasi ???

European Pharmacopoeia 6.0 2008 (p.514), 4.2.2 Volumetric solution do not differ from the prescribed strength by more than 10 per cent. The molarity of the volumetric solution is determined by an appropriate number of titrations. The repeatability does not exceed 0.2 per cent (relative standard deviation). Misal, akan dibuat larutan baku 0,1 N, Yang diperbolehkan : 0,09 - 0,11 [ RSD ≤ 0,2 % ] VIT-HOR

Validasi Metode Titrasi 2005 VIT-HOR

Ermer and Miller, 2005, p.327 VIT-HOR

Is the volumetric method to be validated ? 30

VIT-HOR

Hormon VIT-HOR

Kortison dan Hidrokrtison Kelarutan dalam pelarut: Air : 1 : 5.000 Etanol : 1 : 300-350 Kloroform : 1 : 4 Sedikit larut dalam eter Hidrokortison Kelarutan dalam pelarut: Air : 1 : 10.000 Etanol : 1 : 230 Kloroform : sedikit larut Larut dalam dioksan VIT-HOR

Hormon Hidrocortison dll… VIT-HOR

Kortison VIT-HOR

Hidrokortison VIT-HOR

Reprodusibilitas Antar Column Batch VIT-HOR

Hormon VIT-HOR

Steroid VIT-HOR

Norgestrel VIT-HOR

Norgestrel VIT-HOR

Hormon Norgestrel VIT-HOR

Norgestrel VIT-HOR

E-mail: sudib_kekes@yahoo.co.id Terima Kasih E-mail: sudib_kekes@yahoo.co.id VIT-HOR

VIT-HOR