PROLINE-SPECIFIC AMINOPEPTIDASE ENZYME Oleh : Reza Aditama 20509022

Agenda Pendahuluan Tata Nama Struktur Mekanisme Reaksi Regulasi Purifikasi dan Karakterisasi Aplikasi 4/14/2017

Pendahuluan Aminopeptidase Enzim yang mengkatalisis reaksi hidrolisis atau pemutusan asam amino terminal dari protein atau peptida Pada kingdom hewan dan tanaman banyak ditemukan aminopeptidase Aminopeptidase essensial untuk : - Protein maturation - Degradasi peptida hormonal dan non-hormonal 4/14/2017

Reaksi yang dikatalisis oleh Aminopeptidase Peptida  Peptida (lebih pendek) 4/14/2017

Klasifikasi Aminopeptidase Terdapat beberapa klasifikasi untuk enzim aminopeptidase diantaranya adalah berdasarkan : Jumlah asam amino yang diputus dari NH2 terminal substrat. co/ aminopeptidase, diaminopeptidase - Efisiensi dari asam amino yang diputus dari suatu protein atau peptida. co/ Leucine aminopeptidase, prolin aminopeptidase pH optimum untuk aktivitasnya (basa, asam, atau netral) - Ion atau logam yang diikat pada enzim 4/14/2017

Prolin Aminopeptidase Prolin Aminopeptidase Enzim yang mengkatalisis reaksi hidrolisis atau pemutusan spesifik terhadap residu prolin pada suatu protein atau peptida Ukuran protein bervariasi  Isolasi dari E.Coli : 49.650 Da Jumlah residu : 440 4/14/2017

Distribusi Prolin Aminopeptidase D.F. Cunningham, B. O’ConnorrBiochimica et Biophysica Acta 1343 (1997) 160–186 4/14/2017

Tata Nama NC-IUBMB 3. Hydrolases 3.4 Acting on peptide bonds (peptidases) 3.4.11 Aminopeptidases 3.4.11.9 Xaa-Pro aminopeptidase 4/14/2017

Struktur Prolin Aminopeptidase Homologi mirip dengan AMPM 4 subunit : A,B,C,D Ion Mn2+ 440 residu asam amino Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998) 4/14/2017

Folded Prolin Aminopeptidase Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998) Folded Prolin Aminopeptidase Terdiri dari 2 domain : Domain I (1-174) : 6 β-sheet dan 4 α-helix Domain 2 (175-440) : 6 β-sheet dan 7 α-helix 4/14/2017

Active Site Prolin Aminopeptidase Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998) 4/14/2017

Stereoview Active Site Prolin Aminopeptidase Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998) 4/14/2017

Mekanisme Katalisis Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998) 4/14/2017 Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998)

Mekanisme Katalisis SGAP (1) Y. Fundoiano-Hershcovitz et al. / FEBS Letters 571 (2004) 192–196 4/14/2017

Mekanisme Katalisis SGAP (2) Y. Fundoiano-Hershcovitz et al. / FEBS Letters 571 (2004) 192–196 4/14/2017

Fungsi Dinuclear Metal Hiroshi Sakiyama, et.al, Inorganica Chimica Acta 351 (2003) 256/260 4/14/2017

Inhibisi 4/14/2017

Substrat Ideal 4/14/2017

Inhibisi oleh bestatin Allen Taylor, FASEBJ. 7: 290-298; 1993. 4/14/2017

Inhibisi oleh bestatin Allen Taylor, FASEBJ. 7: 290-298; 1993. 4/14/2017

Purifikasi Ekstraksi dengan Tris-HCl buffer+NaCl 150mM, sentrifugasi dengan 13000 x g selama 20 menit Presipitasi dengan Asam Klorida lalu disentrifugasi dengan 13000 x g selama 20 menit Heat inactivation  inkubasi 45oC selama 1 jam lalu disentrifugasi dengan 13000 x g selama 20 menit Fraksinasi dengan Amonium Sulfat Anion Exchange Chromatography (DEAE Sephadex) Gel Permeasi (Sephadex G-100) Adsorption Chromatography ( hydroxylapatite) F.C. Gollich et.al Protein Expression and Purification 47 (2006) 634-639 4/14/2017

Purifikasi F.C. Gollich et.al Protein Expression and Purification 47 (2006) 634-639 4/14/2017

Karakterisasi 4/14/2017

Aplikasi http://www.biotek.lipi.go.id/wartabiotek/warta11.pdf 4/14/2017 http://www.biotek.lipi.go.id/wartabiotek/warta11.pdf

Aplikasi 4/14/2017

Terima Kasih