Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

G LUKOSA O KSIDASE Syahfitri Anita 20508044 Secretory expression and purification of Aspergillus niger glucose oxidase in Saccharomyces cerevisiae mutant.

Presentasi serupa


Presentasi berjudul: "G LUKOSA O KSIDASE Syahfitri Anita 20508044 Secretory expression and purification of Aspergillus niger glucose oxidase in Saccharomyces cerevisiae mutant."— Transcript presentasi:

1 G LUKOSA O KSIDASE Syahfitri Anita Secretory expression and purification of Aspergillus niger glucose oxidase in Saccharomyces cerevisiae mutant deficient in PMR1 gene Ji-Hyun Ko, Moon Sun Hahm,a Hyun Ah Kang, Soo Wan Nam and Bong Hyun Chunga Protein Expression and Purification 25 (2002) 488–493

2 A GENDA Properti Glukosa Oksidase Aplikasi Glucose oksidase Latar Belakang Tujuan Penelitian Metode Hasil Kesimpulan

3 G LUKOSA O KSIDASE (GO X ) EC FAD sebagai kofaktor

4 M EKANISME +O 2 -H 2 O 2 +D-Glucose -D-Gluconolactone

5 P ROPERTI GO X Terdapat di serangga (lebah, belalang) dan jamur (Aspergillus niger, Penicillium sp dan Botrytis cinerea). Berat Molekul bervariasi antara 150kDa-186kDa (Tsuge et al. 1975) pH optimum 4–7 (Keilin and Hartree 1947; Nakamura and Fujiki 1968; Bao et al. 2001) Titik Isoelektrik (pI) 4.2 (Pazur and Kleppe 1964) Nilai Km Km (mM)pHT (°C)Referensi 198–2485–720–30Bao et al – –38Gibson et al – –30Nakamura and Ogura 1968b Swoboda and Massey 1965

6 S TRUKTUR Struktur 3 dimensi glukosa oksidase dari Apergillus niger

7 S TRUKTUR P RIMER SUBUNIT Interaksi dengan FAD Ikatan disulfida Interaksi dengan Substrat

8 I NHIBISI Ag +, Hg 2+, Cu 2+ dapat menjadi inhibitor melalui pembentukan kompleks secara non kompetitif (Toren and Burger 1968) Inhibisi oleh substrat (glukosa) dapat terjadi ketika kadar oksigen rendah (Nicol dan Duke, 1966) Akumulasi produk (H 2 O 2 dan D- gluconolactone) juga dapat mengihibisi reaksi (Kleppet, 1966, Bao et al.2001)

9 A PLIKASI Penentuan kadar glukosa dengan penggunaan biosensor (Wilson and Turner, 1992). GOx, bersama dengan catalase, digunakan pada berbagai industri makanan dan minuman, seperti dalam pembuatan bir, soft drinks, roti, mayonaise, makanan kaleng dll untuk menstabilkan warna dan rasa dengan penghilangan oksigen (Crueger and Crueger, 1990). Gox juga digunakan untuk produksi asam glukonat yang banyak digunakan dalam industri logam, beton, makanan, kosmetik, obat- obatan dll (Ramachandran et al. 2006).

10 A PLIKASI DI I NDUSTRI MAKANAN Menghilangkan oksigen dalam pembuatan mayonaise dan pengalengan makanan Meningkatkan kualitas textur roti Untuk mengendalikan pencoklatan (browning) pada pemrosesan dan penyimpanan pasta dari buah Bersama lactoperoxidase digunakan sebagai pengawet/agen antimikroba pada industri berbahan dasar susu

11 A PLIKASI DI I NDUSTRI M INUMAN Produksi wine kadar alkohol rendah (Pickering et al. 1998)

12 A PLIKASI DI B IDANG K ESEHATAN : B IOSENSOR Sensor glukosa darah dan cairan tubuh lainnya

13 L ATAR BELAKANG PENELITIAN GOx yang disekresikan pada S. cerevisiae menunjukkan hyperglycosylation yang tinggi dibandingkan dengan GOx dari A. niger Konstruksi ekspresi GOx menggunakan mutan S. cerevisiae yang mana gen PMR1 yang mengkode Ca 2+ -ATPase ditiadakan sehingga dapat menekan hiperglikosilasi GOx

14 T UJUAN Melakukan ekspresi secretori dan pemurnian glukosa oksidase dari Apergillus niger pada S. cerevisiae Menguji pengaruh hiperglikosilasi dari GOx rekombinan terhadap properti enzim dan efisiensi sekresi

15 M ETODE Konstruksi mutan S. cerevisiae dan vektor ekspresi Transformasi dengan plasmid pYGOD-His Kultivasi Pemurnian rekombinan Gox-His 6 Immunobloting SDS-PAGE

16 H ASIL : I MMUNOBLOT Intracellular Extracellular M: marker; 1: Native GOx A. Niger; 1,2: Wild Type ; 3,4 Mutan type

17 E FEK MUTASI PADA PERTUMBUHAN SEL DAN SEKRESI G OX -H IS 6

18 P EMURNIAN

19 P EMURNIAN DAN SDS-P AGE M: Marker 1: GOx pada Wild Type 2: GOx pada Mutan Type

20 P ENGARUH P H GOx A. Niger GOx-His6 mutan type Gox-His6 hiperglikosilasi

21 P ENGARUH T EMPERATUR GOx A. Niger GOx- His6 mutan type GOx – His6 hiperglikosilasi

22 K ESIMPULAN Properti fisik dan efisiensi katalitik dari GOx-His6 mutan pmr1Δ hampir sama dengan GOx native dari A. niger Delesi gen PMR1 pada S. cerevisiae dapat meningkatkan efisiensi sekresi GOx namun menganggu pertumbuhan sel

23 T ERIMA KASIH


Download ppt "G LUKOSA O KSIDASE Syahfitri Anita 20508044 Secretory expression and purification of Aspergillus niger glucose oxidase in Saccharomyces cerevisiae mutant."

Presentasi serupa


Iklan oleh Google