PENDAHULUAN MEKANISME REAKSI ISOLASI DAN PEMURNIAN DEFESIENSI PC.

Presentasi berjudul: "PENDAHULUAN MEKANISME REAKSI ISOLASI DAN PEMURNIAN DEFESIENSI PC."— Transcript presentasi:

1

2 PENDAHULUAN MEKANISME REAKSI ISOLASI DAN PEMURNIAN DEFESIENSI PC

3  Pyruvate carboxylase (PC) memiliki nomor enzim 6.4.1.1  Piruvat karboksilase adalah enzim dari kelas ligase yang mengkatalisis karboksilasi piruvat membentuk oksaloasetat (OAA).

4  PC merupakan enzim allosterik yang diaktifkan oleh efektornya yakni Asetil-CoA  PC mengandung ion Mn2+ yang terikat kuat dan gugus prostetik yang terikat secara kovalen yakni biotin  PC berbentuk tetramer yang terdiri atas 4 subunit yaitu BC (biotin carboxylase), CT (carboxytransferase), BCCP (biotin-carboxy carrier protein), dan PT (PC tetramerization)

5

6

7

8

9 Mekanisme reaksi di atas terjadi dua tahap reaksi parsial

10

11

12  Mekanisme Ping Pong Bi Bi Uni Uni

13

14

15  PC disubklon dari Staphylococcus aureus dalam vektor pET28a kemudian diekpresikan pada E. coli.  Sel yang mengekspresikan PC kemudian dimurnikan dengan : 1. Pestle & Mortar (dengan N2 cair) 2. Centrifuge 3. Dialisis / Kromatografi Penukar Ion  Aktivitas PC dianalisis dengan SDS-PAGE dan spektrofotometer Massa

16  Kekurangan karboksilase piruvat merupakan gangguan bawaan yang menyebabkan asam laktat dan senyawa beracun lainnya yang berpotensi untuk terakumulasi dalam darahasam laktatdarah  Ada dua jenis kekurangan PC berdasarkan tingkat keparahannya: 1. tipe 1: terjadi penumpukan asam laktat dalam darah (asidosis laktit) 2. tipe 2 : terjadi penumpukan amonia dalam darah (hiperamonemia)

17 Terima Kasih