Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt.

Presentasi berjudul: "Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt."— Transcript presentasi:

1 Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt.
Analisis Vitamin dan Hormon Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt.

2 Vitamin Vitamin C Nikotinamid Vitamin B1.HCl Vitamin B12 VIT-HOR

3 Vitamin VIT-HOR

4 Multivitamin Vit.C Vit.B2 Vit.B1 Niacin Vit.B6 Niacinamid Folic Acid
VIT-HOR

5 Pemisahan Vitamin-Vitamin Yang Larut Air [ ion-pairing reagents ]
VIT-HOR

6 Kolom VIT-HOR

7 Gambar: 1 VIT-HOR

8 Ion Pair Reagent Alkylamines Alkylsulfonates VIT-HOR

9 Vitamin B-12 VIT-HOR

10 dapat dianalisis secara:
Vitamin B-12 Untuk Zat Tunggal, dapat dianalisis secara: Spektrofotometri UV atau Vis VIT-HOR

11 HPLC Multivitamin VIT-HOR

12 Kromatogram HPLC VIT-HOR

13 Hasil Pemisahan HPLC VIT-HOR

14 Vitamin C = Ascorbic Acid
VIT-HOR

15 Metode Penetapan Kadar Zat Tunggal
Titrasi Secara Iodimetri (Redok) Titrasi dengan Diklorofenolindofenol (DCIP) VIT-HOR

16 Pen. Kadar Vitamin C [ Iodimetri ]
Netralisasi Timbang seksama lebih kurang 400 mg, larutkan dalam campuran 100 mL air dan 25 mL asam sulfat 2N, tambahkan 3 mL kanji LP. Titrasi segera dengan iodium 0,1N LV. Kesetaraan: - Satu (1) mL iodium 0,1N setara dengan 8,806 mg C6H8O6 [ Vitamin C ] VIT-HOR

17 Pen. Kadar Vitamin C [ Iodimetri ]
BM = 176,13 Satu (1) mL iodium 0,1N setara dengan 8,806 mg C6H8O6 [ Vitamin C ] VIT-HOR

18 Metode Diklorofenolindofenol [ DCIP ]
Vitamin C Ascorbic Acid Dehydroascorbic Acid HSCH2CH(SH)CH2OH : , 3-dithiol-Propanol Reducing agent and converts dehydroascorbic acid to ascorbic acid VIT-HOR

19 Titration Method for Reduced Vitamin C
1. Extract with metaphosphoric acid (HPO3) in HOAC. 2. Titrate with 2, 6-dichloroindophenol (blue). At end point, rose pink (2, 6-dichloroindophenol in acidic condition). VIT-HOR

20 Oxidation and Reduction of Ascorbic Acid
2,6-dichloroindophenol H O O H Cl + O N OH H O H O H C O Cl 2 Blue Color C l O O H O N H O H + H C l O H O H C O 2 Pink color in acidic condition Extra oxidized indophenol form in the absence of ascorbic acidic gives pink color at end point VIT-HOR

21 Calculation for Reduced Vitamin C
A = ml of 2,6-dichloroindophenol for sample titration B = ml of 2,6-dichloroindophenol for blank F = mg of ascorbic acid equivalent to 1 ml of indophenol standard solution V = Initial assay solution volume E = Number of grams X = Volume sample aliquot titrated VIT-HOR

22 Vitamin B1 HCl VIT-HOR

23 Vitamin B1.HCl Titrasi dengan NaOH Titrasi Bebas Air (dengan HClO4)
TBA Metode Penetapan Kadarnya: Titrasi dengan NaOH Titrasi Bebas Air (dengan HClO4) Titrasi Argentometri

24 Vitamin B-1 HCl Titrasi Bebas Air (TBA) dengan HClO4, dalam asam asetat glasial, indikator p-Naftol benzein atau Quinaldin merah. -Adanya Cl, dihilangkan/diendapkan dg pe + an (CH3COO)2Hg. Mengapa ? Kesetaraan: 1 mL 0,1 N HClO4  0,1 x BM/2 mg Vit B1 VIT-HOR

25 Vitamin B1 HCl Klorin total dalam Vitamin B1 dapat ditentukan dengan:
-melarutkan dalam air + asam nitrat encer + larutan AgNO3 >>>, ttt. Endapan yang terbentuk disaring, dicuci dengan air. Cairan hasil cucian (sisa AgNO3) dititrasi dengan NH4CNS. Kesetaraan: 1 mL 0,1 N AgNO3  35,46 mg klorin VIT-HOR

26 Vitamin B1 HCl Klorin sebagai hidroklorid ditentukan dengan cara titrasi menggunakan 0,1 N NaOH, indikator biru brom timol. Kesetaraan: 1 mL 0,1 N NaOH  35,46 mg klorin VIT-HOR

27 Thiamin HCl VIT-HOR

28 Tiokrom Fluorescensi Biru

29 PK. Obat Secara Spektrofluorometri

30 PK. Riboflavin

31 Riboflavin  nm 222 942 267 873 371,5 277 445 324

32 VIT-HOR

33 VIT-HOR

34 PK. Spektrofluorometri (Fluorescensi : hijau kekuningan)
Riboflavin PK. Spektrofluorometri dalam asam asetat 5 %, eksitasi = 445 nm emisi = 530 nm (Fluorescensi : hijau kekuningan)

35 Intensitas fluorescensi
Riboflavin Riboflavin (µg/mL) Intensitas fluorescensi 0,10 5,8 0,20 12,2 0,40 22,3 0,80 43,3 .... ? 15,4 Y = 52,9739 X + 1,0348 ; r = 0,999;  = 88, Kadar = 0,27 (µg/mL)

36 Riboflavin Bila intensitas fluorescensi dibagi : 100 Riboflavin (µg/mL) Intensitas fluorescensi 0,10 0,058 0,20 0,122 0,40 0,223 0,80 0,433 .... ? 0,154 Y = 0,5297 X + 0,0104 ; r = 0,999;  = 27,90 Kadar = 0,27 (µg/mL)

37 Tabel : Koef. Korelasi [r]
db 0,10 0,05 0,02 0,01 0,001 1 0,988 0,997 0,999 1,000 2 0,900 0,950 0,980 0,990 3 0,805 0,878 0,934 0,959 0,992 4 0,729 0,811 0,882 0,917 0,974 5 0,669 0,754 0,833 0,874 0,951 . 20 0,360 0,423 0,492 0,537 0,652 p

38 Y = b X + a Y = nilai respon X = kadar senyawa baku r = koefisien korelasi db = derajad bebas p = taraf kepercayaan / limit of confidence

39 db = n - 2 Literatur : Skoog, D.A., 1985, Principles of Instrumen- tal Analysis, Third Edition, Sounders College Publishing, New York. Harris, D.C., 1987, Quantitative Chemical Analysis, Second Edition, W.H. Freemand and Company, New York. Miller, J.C. and Miller, J.N., 1988, Statistical for Analytical Chemistry, Second Edition, John Wiley & Sons, New York.

40 Labu Takar TC 20 OC VIT-HOR

41 Metode Titrasi DiValidasi
Perlukah Metode Titrasi DiValidasi ???

42 European Pharmacopoeia 6.0 2008 (p.514), 4.2.2
Volumetric solution do not differ from the prescribed strength by more than 10 per cent. The molarity of the volumetric solution is determined by an appropriate number of titrations. The repeatability does not exceed 0.2 per cent (relative standard deviation). Misal, akan dibuat larutan baku 0,1 N, Yang diperbolehkan : 0, ,11 [ RSD ≤ 0,2 % ] VIT-HOR

43 Validasi Metode Titrasi
2005 VIT-HOR

44 Ermer and Miller, 2005, p.327 VIT-HOR

45 Is the volumetric method to be validated ?
30

46 VIT-HOR

47 Hormon VIT-HOR

48 Kortison dan Hidrokrtison
Kelarutan dalam pelarut: Air : 1 : 5.000 Etanol : 1 : Kloroform : 1 : 4 Sedikit larut dalam eter Hidrokortison Kelarutan dalam pelarut: Air : 1 : Etanol : 1 : 230 Kloroform : sedikit larut Larut dalam dioksan VIT-HOR

49 Hormon Hidrocortison dll…
VIT-HOR

50 Kortison VIT-HOR

51 Hidrokortison VIT-HOR

52 Reprodusibilitas Antar Column Batch
VIT-HOR

53 Hormon VIT-HOR

54 Steroid VIT-HOR

55 Norgestrel VIT-HOR

56 Norgestrel VIT-HOR

57 Hormon Norgestrel VIT-HOR

58 Norgestrel VIT-HOR

59 E-mail: sudib_kekes@yahoo.co.id
Terima Kasih VIT-HOR

60 VIT-HOR