Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

Catalase-Peroxidase Active Site Restructuring by a Distant and “Inactive” Domain Ruletha D. Baker, Carma O. Cook, and Douglas C. Goodwin Oleh : Tina Dewi.

Presentasi serupa


Presentasi berjudul: "Catalase-Peroxidase Active Site Restructuring by a Distant and “Inactive” Domain Ruletha D. Baker, Carma O. Cook, and Douglas C. Goodwin Oleh : Tina Dewi."— Transcript presentasi:

1 Catalase-Peroxidase Active Site Restructuring by a Distant and “Inactive” Domain Ruletha D. Baker, Carma O. Cook, and Douglas C. Goodwin Oleh : Tina Dewi Rosahdi ( ) Rina Budi Satiyarti ( )

2 -Termasuk golongan enzim oksido reduktase -Dibentuk dari dua domain peroksidase, yaitu domain N- terminal (KatG N ) dan domain C-terminal (KatG C ) -Mempunyai satu sisi aktif multifungsional yang memfasilitasi aktivitas katalase dan peroksidase -Berperan dalam degradasi hidrogen peroksida (H 2 O 2 ) KatalaseKatalase-PeroksidasePeroksidase (KatG)

3 Siklus Katalitik Aktivitas katalase melibatkan siklus di antara resting dan pembentukan senyawa I Aktivitas katalase melibatkan siklus di antara resting dan pembentukan senyawa I Aktivitas peroksidase mencakup reaksi yang melibatkan pembentukan senyawa I dan senyawa II Aktivitas peroksidase mencakup reaksi yang melibatkan pembentukan senyawa I dan senyawa II

4 Kemampuan Bifungsional Katalase-Peroksidase Enzim Heme dengan aktivitas katalase besar menunjukkan sedikit aktivitas katalase peroksidase, demikian juga sebaliknya. Enzim Heme dengan aktivitas katalase besar menunjukkan sedikit aktivitas katalase peroksidase, demikian juga sebaliknya. Struktural yang sama dari kedua enzim menyediakan sistem yang kuat untuk memisahkan gangguan kecil sisi aktif enzim heme yang berperan penting dalam perbedaan mekanisme dan fungsi. Struktural yang sama dari kedua enzim menyediakan sistem yang kuat untuk memisahkan gangguan kecil sisi aktif enzim heme yang berperan penting dalam perbedaan mekanisme dan fungsi.

5 Domain N-terminal (KatG N ) Mengandung heme terikat Mengandung heme terikat Sisi aktif bifungsional Sisi aktif bifungsional Domain C-terminal (KatG C ) Mengandung 300 asam amino Tidak mengikat heme Tidak mempunyai aktivitas katalitik Jika tidak ada, sisi aktif distal histidin bertindak sebagai ligan pada heme iron  menyebabkan kemampuan sisi aktif histidin sebagai basa terganggu

6 MMMM EEEE TTTT OOOO DDDD EEEE 1. Ekspresi dan pemurnian wtKatG (tipe alami KatG) 2. Ekspresi dan pemurnian Domain KatG, KatG N, dan KatG C 3. Pencampuran dan inkubasi domain 4. Uji aktivitas katalase dan peroksidase 5. Spektroskopi Ultra Violet dan sinar tampak (UV-Vis) 6. Circular Dichroism Spectropolarimetry 7. Spektroskopi Resonansi Paramagnetik Elektron

7 HASIL Far-UV Circular Dichroism Spectra a = KatG N b = KatG C c = wtKatG d = campuran equimolar abcKatG N dan KatG C

8 Dari hasil CD Spectra diperoleh : oPoPoPoPersiapan pemisahan domain, KatGN dan KatGC, tidak dihasilkan pada gangguan mayor untuk isi struktur sekunder yang diharapkan untuk masing-masing domain dari enzim tipe alami oCoCoCoCampuran fisika KatGN dan KatGC tidak dengan jelas merubah isi struktur sekunder setiap protein

9 Reaktivasi KatG N dengan adanya KatG C a. Aktivitas Katalaseb. Aktivitas Peroksidase a = campuran equimolar KatG N dan KatG C b = KatG N c = KatG C d = campuran equimolar KatG N dan bovine serum albumin

10 Aktivasi Katalase dan Peroksidase berdasarkan Waktu Inkubasi pada Campuran Equimolar KatG N dan KatG C K react aktivasi Katalase = 3,4x10 -3 min -1 K react aktivasi Katalase = 3,4x10 -3 min -1 K react aktivasi Peroksidase = 2,5x10 -3 min -1 K react aktivasi Peroksidase = 2,5x10 -3 min -1

11 Pengaruh pH pada k react dan Amplitudo KatG N yang Direaktivasi oleh KatG C k react maksimum diperoleh pada pH 6, yaitu 9,4x10 -3 min -1 k react maksimum diperoleh pada pH 6, yaitu 9,4x10 -3 min -1 Substitusi ke persamaan 1) untuk pH 8-6 menghasilkan pK a = 6,2 dan prediksi k react maksimum = 1,4x10 -2 min -1 Substitusi ke persamaan 1) untuk pH 8-6 menghasilkan pK a = 6,2 dan prediksi k react maksimum = 1,4x10 -2 min -1

12 Pengaruh Ekspresi dan Isolasi KatG C pada Spektrum Absorpsi Sinar Tampak EPR KatG N  Solid line = KatG N  Dashed line = campuran equimolar KatG N dan KatG C  Bold line = campuran equimolar  KatG N dan KatG C (diinkubasi selama 48 jam pada 4 o C)  Dotted line = wtKatG

13 Pengaruh Ekspresi dan Isolasi KatG C pada Spektrum EPR KatG N KatG N KatG C + KatG N ( Penambahan equimolar ) KatG C + KatG N (Inkubasi selama 48 jam pada T=4 o C) Tipe alami KatG

14 Interfaces di antara domain N-terminal dan domain C-terminal KatG Intrasubunit domain C-terminal Intersubunit domain C-terminal domain N-terminal Heme Distal histidin

15 Kesimpulan Pentingnya domain C-terminal pada struktur katalase-peroksidase dan katalisis ditunjukkan oleh kemampuannya untuk mengembalikan domain N-terminal pada konformasi aktif bifungsionalnya. Pentingnya domain C-terminal pada struktur katalase-peroksidase dan katalisis ditunjukkan oleh kemampuannya untuk mengembalikan domain N-terminal pada konformasi aktif bifungsionalnya. Domain C-terminal mengatur folding dan pemeliharaan sisi aktif bifungsional. Domain C-terminal mengatur folding dan pemeliharaan sisi aktif bifungsional.

16 Terima Kasih


Download ppt "Catalase-Peroxidase Active Site Restructuring by a Distant and “Inactive” Domain Ruletha D. Baker, Carma O. Cook, and Douglas C. Goodwin Oleh : Tina Dewi."

Presentasi serupa


Iklan oleh Google