PROLINE-SPECIFIC AMINOPEPTIDASE ENZYME

Presentasi berjudul: "PROLINE-SPECIFIC AMINOPEPTIDASE ENZYME"— Transcript presentasi:

1 PROLINE-SPECIFIC AMINOPEPTIDASE ENZYME
Oleh : Reza Aditama

2 Agenda Pendahuluan Tata Nama Struktur Mekanisme Reaksi Regulasi
Purifikasi dan Karakterisasi Aplikasi 4/14/2017

3 Pendahuluan Aminopeptidase Enzim yang mengkatalisis reaksi hidrolisis atau pemutusan asam amino terminal dari protein atau peptida Pada kingdom hewan dan tanaman banyak ditemukan aminopeptidase Aminopeptidase essensial untuk : - Protein maturation - Degradasi peptida hormonal dan non-hormonal 4/14/2017

4 Reaksi yang dikatalisis oleh Aminopeptidase
Peptida  Peptida (lebih pendek) 4/14/2017

5 Klasifikasi Aminopeptidase
Terdapat beberapa klasifikasi untuk enzim aminopeptidase diantaranya adalah berdasarkan : Jumlah asam amino yang diputus dari NH2 terminal substrat. co/ aminopeptidase, diaminopeptidase - Efisiensi dari asam amino yang diputus dari suatu protein atau peptida. co/ Leucine aminopeptidase, prolin aminopeptidase pH optimum untuk aktivitasnya (basa, asam, atau netral) - Ion atau logam yang diikat pada enzim 4/14/2017

6 Prolin Aminopeptidase
Prolin Aminopeptidase Enzim yang mengkatalisis reaksi hidrolisis atau pemutusan spesifik terhadap residu prolin pada suatu protein atau peptida Ukuran protein bervariasi  Isolasi dari E.Coli : Da Jumlah residu : 440 4/14/2017

7 Distribusi Prolin Aminopeptidase
D.F. Cunningham, B. O’ConnorrBiochimica et Biophysica Acta 1343 (1997) 160–186 4/14/2017

8 Tata Nama NC-IUBMB 3. Hydrolases
3.4 Acting on peptide bonds (peptidases) Aminopeptidases Xaa-Pro aminopeptidase 4/14/2017

9 Struktur Prolin Aminopeptidase
Homologi mirip dengan AMPM 4 subunit : A,B,C,D Ion Mn2+ 440 residu asam amino Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998) 4/14/2017

10 Folded Prolin Aminopeptidase
Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998) Folded Prolin Aminopeptidase Terdiri dari 2 domain : Domain I (1-174) : 6 β-sheet dan 4 α-helix Domain 2 ( ) : 6 β-sheet dan 7 α-helix 4/14/2017

11 Active Site Prolin Aminopeptidase
Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998) 4/14/2017

12 Stereoview Active Site Prolin Aminopeptidase
Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998) 4/14/2017

13 Mekanisme Katalisis Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998)
4/14/2017 Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998)

14 Mekanisme Katalisis SGAP (1)
Y. Fundoiano-Hershcovitz et al. / FEBS Letters 571 (2004) 192–196 4/14/2017

15 Mekanisme Katalisis SGAP (2)
Y. Fundoiano-Hershcovitz et al. / FEBS Letters 571 (2004) 192–196 4/14/2017

16 Fungsi Dinuclear Metal
Hiroshi Sakiyama, et.al, Inorganica Chimica Acta 351 (2003) 256/260 4/14/2017

17 Inhibisi 4/14/2017

18 Substrat Ideal 4/14/2017

19 Inhibisi oleh bestatin
Allen Taylor, FASEBJ. 7: ; 1993. 4/14/2017

20 Inhibisi oleh bestatin
Allen Taylor, FASEBJ. 7: ; 1993. 4/14/2017

21 Purifikasi Ekstraksi dengan Tris-HCl buffer+NaCl 150mM, sentrifugasi dengan x g selama 20 menit Presipitasi dengan Asam Klorida lalu disentrifugasi dengan x g selama 20 menit Heat inactivation  inkubasi 45oC selama 1 jam lalu disentrifugasi dengan x g selama 20 menit Fraksinasi dengan Amonium Sulfat Anion Exchange Chromatography (DEAE Sephadex) Gel Permeasi (Sephadex G-100) Adsorption Chromatography ( hydroxylapatite) F.C. Gollich et.al Protein Expression and Purification 47 (2006) 4/14/2017

22 Purifikasi F.C. Gollich et.al Protein Expression and Purification 47 (2006) 4/14/2017

23 Karakterisasi 4/14/2017

24 Aplikasi http://www.biotek.lipi.go.id/wartabiotek/warta11.pdf
4/14/2017

25 Aplikasi 4/14/2017

26 Terima Kasih