Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

Presentasi sedang didownload. Silahkan tunggu

 Klasifikasi Enzim  Mekanisme Reaksi Enzim  Isolasi, Pemurnian dan Karakterisasi Enzim  Struktur 3D Enzim Pullulanase  Inhibitor Enzim  Kegunaan.

Presentasi serupa


Presentasi berjudul: " Klasifikasi Enzim  Mekanisme Reaksi Enzim  Isolasi, Pemurnian dan Karakterisasi Enzim  Struktur 3D Enzim Pullulanase  Inhibitor Enzim  Kegunaan."— Transcript presentasi:

1

2  Klasifikasi Enzim  Mekanisme Reaksi Enzim  Isolasi, Pemurnian dan Karakterisasi Enzim  Struktur 3D Enzim Pullulanase  Inhibitor Enzim  Kegunaan dan Aplikasi Enzim

3  Klasifikasi Enzim EC Kelas Hidrolase Menghidrolisis ikatan glikosida Pada senyawa pullulan, pati dan amilopektin Pullulanase Recommended Name: pullulan 6-glucanohydrolase Synonim Name:  α-dextrin endo-1,6-α-glucosidase  amylopectin 6-glucanohydrolase  limit dextrinase

4 Pullulanase

5 kultur inokulasikan dalam media LB 500 mL Inkubasi, t= 24 jam, T =37 o C, diinduksi dengan IPTG pada 600 nm

6

7 Kultur bakteri Sentrifugasi pada 6000 rpm, t=20 menit, T=4 o C Supernatan : dimurnikan dan uji aktivitas enzim ekstraseluler pellet Buffer tris- HCl pH 8,1 Sonikasi Sentrifugasi rpm, t=30 menit, T=4 o C Supernatan : dimurnikan dan uji aktivitas enzim intraseluler

8 Crude Extract Sentrifugasi Supernatan pellet Protein dialirkan ke dalam kolom dan dielusi dengan garam Dialisis dengan buffer Enzim Pullulanase Pellet dilarutkan buffer tris-HCl Supernatan : fraksinasi Amonium Sulfat 60 % dan sentrifugasi

9 500 µL pullulan 1 % µLbuffer asetat 0,2 M pH 5,4 dibiarkan selama 15 menit + 50 µL enzim inkubasi T= 37°C t= 4 menit + 1 mL pereaksi DNS campuran divorteks, didihkan, t=5 menit ∑ Gula pereduksi diukur dengan kurva standar glukosa

10

11 Analisis Berat Molekul SDS-PAGE Kristalisasi dan Penentuan Struktur 3D dengan XRD

12 Tabel Hasil Pemurnian Enzim

13 SDS-PAGE Enzim

14 Struktur Kristal Enzim Pullulanase Struktur 3D Enzim Pullulanase

15 Inhibisi Enzim Mekanisme Inhibisi Enzim dapat dibagi 2 yaitu: 1.Inhibisi reversibel •Membentuk kompleks enzim inhibitor yang meningkatkan laju reaksi 2.Inhibisi irreversibel •Membentuk senyawa yang stabil dengan enzim melalui ikatan kovalen dengan residu asam amino pada sisi aktif Enzim ini dapat menginhibisi produk dan sustrat : •Untuk inhibisi substrat  banyak substrat yang dapat digunakan oleh organisme ketika konsentrasi enzim rendah dan ketika konsentrasi enzim tinggi substrat dapat bertindak sebagai inhibitor pertumbuhan yang beracun •Untuk inhibisi produk  Inhibisi produk akan meningkat ketika produk mengikat enzim bebas dan memblok akses ke substrat. Sehingga enzim ini bersifat sebagai inhibitor kompetitif

16 Kegunaan dan Aplikasi Enzim IndustriAplikasi Pengolahan PatiSirup Fruktosa Sirup Maltosa, Maltotriosa Pemanis makanan Pembuatan BirPada pembuatan malt bir Produksi AlkoholProduksi Etanol, butanol, aseton Pembuatan RotiMengubah pati menjadi gula fermentasi TekstilPada proses pembuatan kain katun untuk memperkuat benang dan men cegah kerusakan pada proses penenunan DetergenSebagai aditif pada detergen pencuci piring dan pakaian

17 REFERENSI Malle, D., T. Itoh, W. Hashimoto, K. Murata, S. Utsumi and B. Mikami, 2006, Overexpression, purification and preliminary X-ray analysis of pullulanase from Bacillus subtilis strain 168, Acta Cryst. (2006). F62, Singh, Ram S., G. K. Saini, J. F. Kennedy, 2010, Maltotriose syrup preparation from pullulan using pullulanase, Carbohydrate Polymers 80 (2010) 401 – 407. Zhang, H., Y. Tian, Y. Bai, X. Xu, Z. Jin, Structure and properties of maize starch processed with a combination of α- amylase and pullulanase. Int. J. Biol. Macromol (2012) 1-7.

18


Download ppt " Klasifikasi Enzim  Mekanisme Reaksi Enzim  Isolasi, Pemurnian dan Karakterisasi Enzim  Struktur 3D Enzim Pullulanase  Inhibitor Enzim  Kegunaan."

Presentasi serupa


Iklan oleh Google